猪喘气病,又叫猪支原体或猪霉形体病,也称猪地方性肺炎。据最近美、英资料报道:检疫屠宰猪喘气病地区的肥猪,发现有喘气病变的占30%-80%,饲料利用率降低14%-20%,增重降低25%-30%,严重影响养猪的经济效益。多西环素(Doxycycline),又称强力霉素、脱氧土霉素,它为四环素的第二代衍生物,其抗菌作用机理是通过与细菌核蛋白体30S亚基的结合,抑制细菌蛋白质的合成,达到抑制细菌的作用。多西环素作为一种广谱抗生素,对多种革兰氏阳性菌和阴性菌以及一些衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体都有一定的抗菌活性,在兽医临床上常用于消化道、呼吸道等细菌的感染。为了客观、科学地评价长效盐酸多西环素注射液对猪喘气病的临床疗效,按农业部《兽药临床试验技术规范》(试行)要求,华南农业大学在广东温氏食品集团有限公司属下的开平、恩平、阳东养猪分公司,收集3-5批自然感染猪喘气病的长白、大白、皮特兰、杜洛克四元杂交自然感染病猪150头,以恩诺沙星注射液为对照药物,按肌注给药方式进行临床疗效试验,为制定临床合理给药方案提供依据。
一、材料与方法
1.试验药品
长效盐酸多西环素注射液,含量10%,批号20090301,由洛阳惠中兽药有限公司提供。
对照药品:恩诺沙星注射液,含量10%(50mL:5g),批号20100201,郑州联美利华生物科技有限公司。试验前对该制剂进行了含量测定,结果为标示量的9.96%。
2.试验动物
在广东温氏食品集团有限公司属下的开平、恩平、阳东养猪分公司,收集了3-5批疑似副猪副嗜血杆菌病的长白、大白、杜洛克三元杂交自然病例猪170头,日龄为40-45天。经临床确诊后,按试验要求选择阳性病猪150头为试验猪,分成5组,每组30头。见表1。
3.疑似猪喘气病的确诊
临床观察与检查
病猪体温达到40℃以上,精神不振,发出声音低沉的干咳,呼吸时呈犬坐状,进食途中呈连续的痉挛性咳嗽,呼吸困难,呼吸次数达90-100 次/min,严重时张口呼吸。
病理变化
剖检病死猪可发现肺有不同程度的水肿和气肿,发生病变部位呈淡红色,界限明显,肺尖叶呈典型的“肉样”实变,肺门和纵膈淋巴结显著肿大,有炎性渗出物,并且组织和淋巴细胞增生。
实验室诊断
涂片检查:取病猪肺部病灶与健康肺部组织交界处的切面,用洗净干燥的载玻片制成涂片,自然干燥数分钟后, 用甲醇固定3 min,用pH7.2 的磷酸盐缓冲液稀释20 倍的姬姆萨氏染色液染色3h,冲洗、干燥后立即用丙酮溶液浸洗1次,然后镜检,可见有紫色环状、轮状、球状等多形态微生物。
根据流行病学调查、发病症状、剖解变化及实验室检测等结果,确诊病猪感染喘气病。
4.试验性治疗:
经过确诊后,立即选择猪喘气病病猪共150头(均表现有典型症状),按表1分别对各组猪给药。
表1 实验性治疗分组及处置
编号 |
组 别 |
数量 |
处 理 |
1 |
长效盐酸多西环素注射液高剂量组 |
30 |
按2倍推荐剂量,肌注给药,即20mg/kg.b.w,在出现发病症状时用药 |
2 |
长效盐酸多西环素注射液中剂量组 |
30 |
按推荐剂量,肌注给药,即10mg/kg.b.w,在出现发病症状时用药 |
3 |
长效盐酸多西环素注射液低剂量组 |
30 |
按1/2推荐剂量,肌注给药,即5mg/kg.b.w,在出现发病症状时用药 |
4 |
恩诺沙星注射液对照组 |
30 |
按推荐剂量使用,在出现发病症状时开始用药,每天1次,连用3天 |
5 |
发病不给药组 |
30 |
对被确诊为猪喘气病猪,不给药,观察 |
5.疗效评价指标
无效率:在试验期间,出现猪喘气病的典型症状并死亡,尸体剖检有特征性病变确定为死亡;经给药治疗后猪的临床症状未见明显的改善者确定为无效。根据死亡猪和治疗无效猪的数量计算无效率。
治愈率:在试验给药治疗和观察期间,猪用药后精神、食欲均恢复正常,猪喘气病的典型症状消失者确定为治愈,根据治愈的数量计算出治愈率。
有效率:在试验给药治疗和观察期间,治愈猪以及给药后症状有明显减轻者,均判定为有效。据此计算有效率。
6.数据分析和处理
用生物统计学(X2卡方检验)对无效率、治愈率及有效率等进行差异显著性比较。
二、试验结果
各试验组组的治愈率、有效率、无效率见表2。
表2 长效盐酸多西环素注射液实验组与对照组疗效比较
编号 |
组别 |
头数 |
治愈率 (%) |
有效率 (%) |
无效率 (%) |
与第5组比较 (X2检验) |
与第4组比较 (X2检验) |
1 |
长效盐酸多西环素注射液高剂量组 |
30 |
83.3 (25/30) |
93.3 (28/30) |
6.7 (2/30) |
X2=52.5 |
X2=4.3 |
2 |
长效盐酸多西环素注射液中剂量组 |
30 |
80.0 (24/30) |
86.7 (26/30) |
13.3 (4/30) |
X2=45.9 |
X2=1.7 |
3 |
长效盐酸多西环素注射液低剂量组 |
30 |
60.0 (18/30) |
66.7 (20/30) |
33.3 (10/30) |
X2=30.0 |
X2=0.32 |
4 |
恩诺沙星注射液对照组 |
30 |
66.7 (20/30) |
73.3 (22/30) |
26.7 (8/30) |
X2=34.7 |
— |
5 |
发病不给药组 |
30 |
— |
— |
100.0 (30/30) |
— |
— |
注:有效率比较时,X2卡方检验的判定标准:当df=1时,X2≥3.84表示差异显著,X2≥6.63表示差异极显著。
由表2可见,以有效率为评价指标,长效盐酸多西环素注射液高、中、低剂量组及恩诺沙星注射液对照组与发病不给药对照组对猪喘气病的治疗效果差异极显著。长效盐酸多西环素注射液高、中、低剂量组与恩诺沙星注射液对照组对猪喘气病的有效率分别为93.3%、86.7%、66.7%、73.3%。长效盐酸多西环素注射液高剂量组对猪喘气病的治疗效果优于恩诺沙星注射液对照组,差异显著(0.01<p<0.05);长效盐酸多西环素注射液中剂量组对猪喘气病的治疗效果优于恩诺沙星注射液对照组,但差异不显著(p>0.05);长效盐酸多西环素注射液低剂量组对猪喘气病的治疗效果较恩诺沙星注射液对照组差,但差异也不显著(p>0.05)。
三、讨论
综合本次试验治疗结果,以有效率为评价指标,结果表明:长效盐酸多西环素注射液按10mg/kg.b.w肌肉注射,给药一次,对猪喘气病有良好的治疗效果。
建议临床推荐剂量:使用10%长效盐酸多西环素注射液用于治疗敏感菌感染的细菌性疾病,可按10mg.kg-1b.w.肌肉注射,每两天给药一次。