油乳剂灭活疫苗免疫的唯一方法就是注射，分为皮下注射和肌肉注射。皮下注射以颈部皮下注射为主，肌肉注射可采用浅层胸肌注射和腿肌注射。
1. 颈部皮下注射
颈部由于皮下活动区域较大，皮下血管丰富，油乳剂灭活疫苗吸收迅速，免疫效果好，所以颈部皮下注射是油乳剂灭活疫苗免疫接种的最佳方法。
但是，颈部皮下注射如果注射不当，也会造成严重不良后果。颈部由于肌肉较少，如果方法不当将油乳剂灭活疫苗注射到颈部肌肉中，会引起鸡颈部肌肉肿胀，表现颈部不能伸直，严重影响颈部活动，从而影响鸡的正常采食、饮水，造成鸡生长发育受阻，严重时可导致鸡逐渐消瘦，甚至死亡。影响时间可达一个月以上。颈部注射时如果太靠近头部，注射疫苗后由于油乳剂灭活疫苗在皮下的游离，流到头和脸的皮下，造成肿头、肿脸的现象。
颈部皮下注射的正确方法：小鸡一人操作；大鸡两人操作，一人保定鸡，一人注射。注射时用拇指和食指把鸡颈部后1/3处皮肤捏起，使皮肤和肌肉分离，注射器针头向着背部方向，以小于30度的角度刺入捏起的皮下，注射速度不宜过快。注射时要防止刺穿另一侧皮肤将疫苗注射到体外，也要防止注射到肌肉内或刺伤颈椎。
2.腿部肌肉注射
腿部肌肉注射一般不宜采取。腿部肌肉较少，注入油乳剂灭活疫苗不易吸收，影响鸡的活动和采食，从而影响生长和生产。由于大腿内侧血管和神经较丰富，要防止针头刺入内侧，否则会刺伤神经或血管，导致鸡瘫痪或死亡。腿部注射的部位应靠近上部，在膝关节上方，大腿外侧。此方法对于笼养鸡较好。一般可用左手拉出一只鸡腿，拨开外侧羽毛，右手持注射器注射。
3.浅层胸肌注射
浅层胸肌注射也是油乳剂灭活疫苗免疫常用的方法。鸡的胸部肌肉较丰满，相应的血管和神经较少，注射油乳剂灭活疫苗时操作较方便，也比较安全，但其吸收较颈部皮下注射稍差一些。如果注射过深，可能会刺入胸腔或刺伤肝脏而导致鸡注苗后猝死。
浅层胸肌注射的方法：注射部位在胸部的前1/3处；两侧均可。针头与注射部位大约成30度角，朝向背部方向刺入胸肌，切忌垂直刺入和在后部刺入，一定要浅层注射，避免深层注射。