1．1日龄是否需要活苗免疫？免疫效果？母源抗体对免疫的影响有多大？
2．早期免疫是否需要做灭活苗? 多大日龄做比较合适？
3．育雏期需要做几次活苗免疫？
4．母源抗体的衰减规律？
5．育雏期已使用灭活苗免疫，育成期是否还需免疫？
6．产蛋期应如何免疫？
本试验通过不同免疫程序在育雏期的免疫抗体结果对比，制定出当前的饲养环境中科学合理的雏鸡免疫程序。通过生产实践中对育成期、产蛋期的抗体检测，总结出这两个阶段合理的免疫程序。
一、材料与方法
（一） 材料
试验动物 父母代海兰褐种鸡
试验仪器及用品 96孔板、微量移液器、振荡器、试管、注射器、9号针头、离心机、30毫升滴瓶、先灵葆雅公司和夏菲特公司提供的新城疫活苗、北京市生物药品厂提供的新城疫灭活油乳剂、中国兽医监察所提供新城疫HI抗原、生理盐水。
（二）方法
1．鸡群的免疫
试验共160只健康父母代海兰褐雏鸡，随机分成8个小组，每组20只，各组的免疫内容和方法如表1所示：
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1日龄 |
7日龄 |
21日龄 |
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第1组 |
ND活苗（点眼） |
不免疫 |
ND活苗（点眼） |
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第2组 |
不免疫 |
ND活苗（点眼） |
ND活苗（点眼） |
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第3组 |
ND活苗（点眼） |
ND活苗（点眼） |
ND活苗（点眼） |
|
第4组 |
ND活苗+ND油苗
（点眼）＋（颈皮下注射） |
ND活苗（点眼） |
ND活苗（点眼） |
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第5组 |
ND活苗（点眼） |
ND活苗+ND油苗
（点眼）＋（颈皮下注射） |
ND活苗（点眼） |
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第6组 |
ND活苗（点眼） |
ND活苗（点眼） |
ND活苗+ND油苗
（点眼）＋（颈皮下注射） |
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第7组 |
ND活苗（点眼） |
11日龄，ND活苗+ND油苗
（点眼）＋（颈皮下注射） |
24日龄，ND活苗（点眼） |
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对照组 |
未免疫 |
未免疫 |
未免疫 |
表1 各组的免疫内容和方法
备注： 1日龄新城疫活苗为IV系克隆化疫苗，由先灵葆公司提供；7日龄ND活苗为VH疫苗，由夏非特公司提供；21日龄ND活苗为IV系疫苗，由先灵葆雅公司提供；ND油苗由北京市生物药品厂提供。活苗免疫剂量2头份，油苗免疫剂量0.3毫升/只。
2．育雏期的HI试验
心脏采血法每只鸡采取1毫升血液，HI试验参照傅先强、刘占君等主编的《养禽场禽病检验手册》。从7日龄开始监测，每3天测一次抗体值，一直到6周龄。
3．育成期的HI试验
心脏采血法每只鸡采取1毫升血液，HI试验参照《养禽场禽病检验手册》。从7周龄开始监测，每周测一次抗体值，一直到22周龄。
4．产蛋期的HI试验
心脏采血法每只鸡采取1毫升血液，HI试验参照《养禽场禽病检验手册》。产蛋期间每半个月测一次抗体值，直到抗体值降到9以下。
二、 结果与分析
（一）育雏期的ND抗体监测结果
试验结果如表2和图1～图6所示。从表2中可知，免疫接种的雏鸡抗体滴度先下降后上升，7日龄时，抗体滴度在7log2～8log2之间，以后抗体逐渐往下降，一直到25日龄时降到最低，一般为2log2左右；25日龄后逐渐上升，5周龄趋于稳定。未经免疫的雏鸡4周龄后母源抗体几乎降到零。
图1 实验3与实验4鸡群的ND抗体变化曲线
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7 |
10 |
13 |
16 |
19 |
22 |
25 |
28 |
31 |
34 |
37 |
40 |
42 |
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实验1 |
8.00 |
6.70 |
6.20 |
5.40 |
3.90 |
2.80 |
1.40 |
4.90 |
6.20 |
6.00 |
4.50 |
5.30 |
5.10 |
|
实验2 |
7.30 |
5.90 |
4.90 |
5.60 |
4.90 |
3.50 |
1.30 |
5.00 |
5.70 |
5.40 |
5.10 |
4.70 |
4.60 |
|
实验3 |
6.90 |
5.80 |
5.80 |
4.80 |
3.30 |
2.20 |
2.00 |
5.20 |
6.20 |
6.70 |
7.00 |
6.70 |
6.80 |
|
实验4 |
8.00 |
6.20 |
5.80 |
5.30 |
3.60 |
4.00 |
3.20 |
5.10 |
6.00 |
6.50 |
6.70 |
6.80 |
7.30 |
|
实验5 |
7.70 |
6.00 |
6.20 |
6.10 |
5.30 |
4.00 |
4.30 |
6.60 |
7.80 |
8.00 |
8.10 |
8.60 |
8.70 |
|
实验6 |
7.50 |
6.70 |
5.80 |
5.60 |
3.90 |
3.00 |
1.90 |
5.80 |
7.80 |
8.10 |
8.00 |
8.50 |
8.60 |
|
实验7 |
7.20 |
6.40 |
5.40 |
4.80 |
4.30 |
4.60 |
4.20 |
6.60 |
7.10 |
7.80 |
7.60 |
8.90 |
8.40 |
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对照组 |
7.60 |
6.70 |
5.90 |
4.80 |
3.30 |
3.10 |
2.10 |
0.5 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
图1：实验3与实验4鸡群的ND抗体变化曲线
如图1所示，实验4中的鸡群 1日龄时免疫接种了ND油苗，实验3没有，而实验4与实验3鸡群的ND抗体消长曲线基本一致，说明1日龄没有免疫接种ND油苗必要。
图2：实验3、实验5和实验7鸡群的ND抗体变化曲线
从图2的3条ND抗体变化曲线可知，7日龄或7日龄后免疫ND灭活苗有效，其抗体无论峰值还是最低值均比单纯使用活苗组高2个滴度；抗体最低值在4log2左右，而不免灭活苗组在2log2左右。
图3：实验5、实验6和实验7鸡群的ND抗体变化曲线
实验5、7与实验6做比较说明早免灭活苗好于晚免。虽然3个组的抗体峰值差异不显著，但早免灭活苗组抗体最低值在4log2左右，而晚免灭活苗组在2log2左右，抗体差异如图3所示。
图4：实验1、实验2和实验3鸡群的ND抗体变化曲线
实验3与实验1、2做比较说明前三周三次活苗免疫要好于两次活苗免疫。从抗体曲线可看出，前4周时抗体差别不大，但从5周龄开始，抗体滴度明显高于两次活苗免疫组。
图5：实验5、实验6和实验7鸡群的ND抗体变化曲线
实验1、2与对照组（7-25日龄）的抗体曲线比较说明：1日龄或7日龄首免活苗，由于受母源抗体、不健全的免疫器官、初次免疫的影响，几乎不能产生有效的体液抗体；主要产生局部黏膜抗体与免疫记忆细胞。
图6：对照组中鸡群ND母源抗体变化曲线
母源抗体大约在4周龄降至0，但在2周龄后已不能给鸡群提供保护。此年龄段是免疫空白期；这就不仅要求在2周龄以内免疫，并且加强对鸡群的隔离、消毒工作非常重要。
（二）育成期的ND抗体监测结果
对育成期ND抗体进行监测，其结果如图7所示：
图7：育成期ND抗体变化规律
鸡群经过3次活苗和1次灭活苗免疫后，监测育成鸡的抗体变化规律，发现在8～10周龄、15～17周龄抗体有下降趋势，因而在这两个阶段应进行活苗免疫；同时为了产蛋期有一个高且稳定的抗体，在产蛋前的3～4周需有一次灭活苗免疫。
（三）产蛋期的ND抗体监测结果
对产蛋期ND抗体进行监测，其结果如图8所示：
图8：产蛋期ND活苗免疫后的抗体变化规律
产蛋鸡ND抗体值低于9时细雾滴气雾免疫，免后15天抗体达到峰值，可以维持4个月。考虑到不同免疫方法对抗体的影响及环境的差异，建议产蛋鸡2～4个月活苗免疫一次。
三、结论
（一）雏鸡早期ND免疫应坚持的原则
1．活苗与灭活苗联合使用。活苗可为鸡群提供局部黏膜抗体，保护疾病入侵的门户。通过疫苗在体内的占位性免疫，先入为主，干扰野毒的入侵。灭活苗产生的抗体高且维持时间长，无论是峰值抗体还是最低值抗体均比只用活苗组高2～3个滴度左右。但灭活苗的使用日龄应在1～2周龄，过早免疫不能产生有效抗体，晚免则使抗体产生延迟。
2．提倡1日龄活苗免疫，尽早产生局部黏膜抗体。雏鸡30日龄以前，体液免疫和细胞免疫机能不健全，对侵入机体的病毒清除能力差，对注射灭活苗产生的免疫应答低，早期抵抗NDV感染的机制主要依靠的是黏膜的局部免疫作用。尽管10日龄前活苗免疫由于免疫器官尚未发育成熟、母源抗体的中和作用、首次免疫等因素存在，不能产生良好的体液抗体。但其主要作用是产生局部黏膜抗体和免疫记忆细胞，且这种抗体的产生不受母源抗体的影响，因而要尽早落实活苗免疫。
3．育雏期间3次免疫的间隔时间以1～2周为最佳。即1日龄首免，7～12日龄二免，21～24日龄三免。机体接受抗原刺激以后，在产生体液免疫的同时也产生免疫记忆细胞，在1～2周的间隔时间内，再次接受相同抗原刺激时，免疫记忆细胞会在短时间内产生大量的抗体。呼吸道和消化道的黏膜细胞2周会产生生理性脱落，导致免疫记忆丧失。所以育雏期间相邻两次免疫时间间隔1～2周为宜，时间过长不能产生良好的免疫效果。
4．无论采用哪种免疫程序，都不能给2～4周龄的鸡群提供有效抗体保护，此年龄段是疾病易感期，做好隔离消毒工作非常重要。
5．鸡群经过3次活苗和1次灭活苗免疫后，监测育成鸡的抗体变化规律，发现在8～10周龄、15～17周龄抗体有下降趋势，因而在这两个阶段应进行活苗免疫；同时为了产蛋期有一个高且稳定的抗体，在产蛋前的3～4周需有一次灭活苗免疫。
6．由产蛋鸡ND免疫后的抗体值变化规律看：产蛋期需2～4个月活苗免疫一次。
（二）合理的免疫程序
综上所述，在ND流行地区，建议合理的免疫程序为：
首免：1日龄，新城疫IV系克隆化疫苗或B1株点眼或粗雾滴喷雾。
二免：7～12日龄，新城疫 IV系克隆化或B1株点眼+灭活苗注射。
三免：21～25日龄，新城疫 IV系活苗点眼。
四免：8～10周龄，新城疫IV系活苗点眼或喷雾。
五免：产蛋前3～4周龄，新城疫IV系活苗点眼或喷雾+灭活苗注射。
产蛋期：2～4个月免疫一次，IV系活苗点眼或喷雾。
