目前在动物临床上,所见皮肤移植均为皮肤微粒或嵌植移植,微粒体移植是北京积水潭医院张名良于上世纪80年代创立的一种新的皮肤移植技术,即:微粒皮肤移植术。目前此项技术已在人医方面推广应用。其基本原理既是皮片的扩张,主要是依靠边缘细胞同一面积的皮片分割愈小总的边缘愈长,处于皮片边缘的细胞愈多,扩展率愈大。目前此项技术在动物方面的应用还未见报道,因此我们欲将此项先进技术应用到动物医学中来,为动物临床提供一种新的治疗手段。本试验采用微粒皮肤移植技术,在家兔体上进行自体皮肤移植,来尝试和掌握这种新技术,为今后的动物临床提供一种新的技术手段。
1 材料与方法
1.1 实验动物 选用两只健康的白色家兔,体重一只2.1 kg,一只1.6 kg,由延边大学小动物室提供。
1.2 器材 手术刀、直剪、巾钳、针线、持针器、止血钳、剃须刀、5 ml注射器、纱布、真丝绸布、创口贴、漏盘、盛水托盘。
1.3 药品 3%盐酸普鲁卡因、生理盐水、青霉素、新洁尔灭、烧伤膏、云南白药、消炎粉。
1.4 方法
1.4.1 人造皮肤缺损创 将家兔放于多功能手术台上保定,对其一侧臀部分别进行剃毛、清洗,用0.1%新洁尔灭消毒,将3%普鲁卡因注射液于臀部做局部扇形浸润麻醉,手术切开皮肤全层,彻底止血。造创面积为5 cm×5 cm。
1.4.2 造创后皮肤的护理 在对创面充分进行止血后,用青霉素溶解生理盐水清洗创面,除去血污、渗出液及组织碎片。在第1天将云南白药覆于创面,外盖上纱布,用胶带加以固定。以后每隔1天处理1次,揭去纱布,用含青霉素的生理盐水去除脓膜,同样将云南白药覆于创面,外盖上纱布,用胶带加以固定。第3天则改用烧伤软膏涂抹创面。造创后的第5天,创面开始出现粉红色,有光泽,颗粒状较大的肉芽,肉芽面上有一薄层脓性分泌物。原来的新鲜创逐渐变为肉芽创,用青霉素的生理盐水冲洗肉芽面,除去分泌物并修整不健康的肉芽组织。用烧伤软膏继续涂抹创面。第12天,肉芽面分泌物减少,肉芽覆盖了整个创面,肉芽颗粒致密、坚实、无水肿,呈现粉红色有光泽;肉芽面基本与皮肤等高,若有赘生肉芽组织应将其切除,并注意止血,此时适宜皮肤移植。
1.4.3 皮肤移植前的创面处理 于植皮前1 h,彻底处理创面,用刮脸刀片除去痂皮以充分暴露肉芽组织,用含青霉素的生理盐水清洗,然后用浸有生理盐水的纱布覆盖创面保护肉芽面,以待植皮。
1.4.4 异体皮覆盖物的制备 取已准备好的提供异体皮肤的家兔一只,在其一侧臀部剃毛,用清水洗净,然后用0.1%新洁尔灭消毒,取略大于移植区创面的全层皮肤一块,修整、备用。取皮时要注意皮块的完整性,同时也要注意皮块的大小、形状要与移皮区的大小、形状相符。在微粒植皮前先将大张异体皮按创面形状剪裁拼接好,使移植缝合后稍有张力。取皮后的试验用兔要进行止血消毒,涂抹创伤药物,包扎,防止创口感染,使创口尽快愈合。
1.4.5 供皮区的准备及微粒皮肤的制备 选用含有真皮层的臀部薄层皮片。在取皮前再用含青霉素的生理盐水给供皮区清洗。在无特制取皮器械时,可用持针器夹持灭菌刮脸刀片(纵行断成两片)进行取皮。令助手使供皮区皮面保持平整、紧张,以便于取皮,术者右手持刀与皮肤呈30°角倾斜切入皮内,再改用10~15°角作拉锯状切去皮片,取皮时以能够透过切取的皮片看到刀刃以及皮片的供皮创面上有许多密集而细小的出血点为宜。取皮面积要适宜(一般取皮面积与移植区创口面积比约为1~15∶1)。取下的皮片立即放入盛有青霉素生理盐水的无菌医用搪瓷盘中,然后用剪刀剪成尽可能小的微粒皮(应小于1 mm3),放入生理盐水中备用。用生理盐水清洗供皮区,除去血污,对取皮处的周围皮肤用碘酊消毒,酒精脱碘,然后用绷带包扎。
1.4.6 微粒皮块的移植 以圆形塑料盘制成悬浮翻转微粒皮的漏盘,盛水托盘为玻璃器皿,其规格要大于圆形漏盘的面积。术前高压消毒。转播皮粒的为光滑的渗水快的真丝绸布,以0.1%新洁尔灭液浸泡消毒备用。将微粒皮悬浮于漏盘内的生理盐水中悬动后使皮粒漂浮并均匀分布,托起漏盘待水自盘底小孔漏出,微粒皮沉落于盘内绸布上,此时大多数微粒皮的真皮面向下,表皮面向上,将贴附有微粒绸布的一面贴附在制备好的异体皮的真皮上,然后轻轻均匀地按压绸布后揭去纱布,皮粒则黏附在异体皮上,即大多数皮粒真皮面朝上,表皮向下。最后将整张异体皮移植于创面,并将异体皮与创面边缘缝合。缝合时,先将异体皮的四角与创面边缘作结节缝合,进行固定。固定时,缝好第一针后,先缝对角再缝两侧。最后,在每两针之间再各补做两针结节缝合。
1.4.7 植皮后的创面护理 在植皮后的前4天内,采用非开放疗法,用创口贴固定。4天后,揭去创口贴,观察异体皮变化情况,如果异体皮呈干燥样,无脓汁血液流出,表明微粒皮肤生长良好,不用继续处理,任其自然生长。如果有创口感染,有脓汁、血液流出,用生理盐水棉球清洗植皮部位,动作要轻,以免擦掉皮块。必要时,再进行皮粒的移植。处理时要严格遵循无菌操作,所有的器械和敷料应进行严格消毒。
1.5 微粒皮的愈合标准 根据张明良等微粒移植结果分类:我们将微粒皮肤移植术后创面愈合情况分为3类。优:微粒皮能完全扩展融合,创面愈合90%以上,残余小创面经换药后全部愈合;良:微粒皮未能完全扩展融合,创面愈合60%-89%,尚有较大创面需补植自体皮才能愈合;差:微粒皮生长差,创面愈合在60%以下,需多次移植自体皮方能愈合。
2 结果
2.1 植皮后前4天内,采用非开放疗法,4天后,揭去创口贴,发现异体皮已干燥,说明生长良好。
2.2 6天后,异体皮脱落,此时创面结痂,结痂部位清晰可见移植微粒皮的痕迹。
2.3 8天后,创面面积缩小,痂皮颜色变深,移植微粒皮的痕迹变得不明显。
2.4 10天后,创面面积进一步缩小,此时已经无任何移植微粒皮的痕迹。
2.5 12~13天后,创面基本愈合。
3 讨论及小结
3.1 微粒皮肤移植的优点 微粒皮肤移植确实体现了省皮、省时、操作简单的优点,提高了皮肤移植的成功率,若皮源相对充足时,此方法可减少患畜供皮区创伤,从而减少了创口感染的机会,试验结果显示,微粒皮肤移植效果较好,取材广、价廉。其方法简单,操作容易,对工具要求不高,适合临床广泛应用,手术一次完成,明显缩短了创面愈合时间,减少了临床工作量。这种方法结合了上皮细胞培养与传统的自体皮片嵌植技术的优点,充分利用了自体皮源,创面愈合后瘢痕较平坦。但临床应用时应解决手术切痂安全性及创面能否有效地严密覆盖和封闭,这是保证手术切痂微粒皮存活的关键。
3.2 异体皮的质量 注意异体皮的质量,覆盖物存活是微粒自体皮修复创面的前提,感染、全身营养状况低下、异体皮活力差均可使异体皮过早失去保护创面及微粒自体皮肤的作用。质量差的异体皮则可致过早排斥及易致积液、积脓、液化脱落,明显影响微粒皮肤的存活,我们准备的新鲜微粒皮肤,保存时间不宜过长(不超过1天),否则效果欠佳。同种异体皮是目前最理想的微粒皮覆盖物,异体皮的质量必须有保证。
3.3 创面的处理 正确的创面处理是预防术区感染的关建,术前彻底清除溶解液化的坏死组织,彻底暴露肉芽组织。术中创面消毒严格,刮除肉芽组织至纤维板层,减少出血,使创面基底平坦,植皮易存活且愈后瘢痕轻。
3.4 术前术后的营养支持治疗 纠正低蛋白血症、贫血,纠正水电解质酸碱失衡,同时根据创面细菌培养选择敏感的抗生素预防感染。多喂一些营养丰富的饲料,增强机体抵抗力,以使全身情况稳定,有利于创面愈合。
3.5 注意皮粒均匀漂浮 在漂浮时,应该注意皮粒的均匀性,以免局部过稀,影响创面覆盖,同时注意受供皮面积比例,虽然在供皮区很小时,微粒植皮受皮面积与植皮面积之比虽然很大,但由于异体皮排异较快,如果皮源允许,应缩小该比例,因为微粒皮密度大,可加快融合。
3.6 微粒皮的大小及应用比例 微粒皮的皮粒大小及应用比例也可影响手术效果。在微粒皮的制作过程中,皮粒应尽量小。这样可使微粒皮均匀地分布于异体皮真皮面上。移植微粒皮的密度越大,创面愈合越快。我们体会以5~10∶1的比例移植可使切痂创面一次愈合达90%以上。
3.7 术后植皮部位制动 如果术后受皮部位制动欠佳,活动过多等均会导致植皮失败。
3.8 根据有关资料,影响微粒皮存活的主要因素有:
(1)微粒皮制作不合格(过于粗大),移植时部分微粒皮倒置而失活。
(2)异体皮质量差,过早排斥分离脱落。由于同种皮坏死,不能紧密贴附在创面上,容易积液。发生感染时则积脓,非常小的微粒皮也不能存活,它是导致手术失败的最主要和最不利的因素。
(3)术后败血症。
(4)创面坏死组织未能彻底清除,使在该部位的同种皮及微粒皮均不能存活。
(5)术后受皮部位制动欠佳,活动过多等均会导致植皮失败。为此,要提高微粒皮肤移植的存活率,必须消除上述不利因素,同时应加强全身综合治疗,及时防治各种并发症,微粒皮肤移植才能取得满意效果。