1、细菌检查
无菌取病鸡心、肝和脾直接涂片,革兰氏染色,镜检,未见到细菌。将病料接种于鲜血琼脂培养基上,37 ℃培养48 h,未见有菌落生长。
2、血液检查
(1)鲜血压片镜检 取病鸡心血1滴,滴加在载玻片上,加等量灭菌生理盐水,然后用接种环在酒精灯上灼烧消毒后将其混匀,再盖上盖玻片,光学显微镜下(油镜暗视野)观察,可见红细胞表面有大量的黄褐色寄生虫体,有单个寄生也有成链状寄生,游离的虫体较少,加生理盐水后,虫体可作伸展、收缩和转体等动作,有虫体附着的红细胞上下震动或左右运动,红细胞呈现锯齿状、齿轮状和星芒状等不规则形状,也有部分红细胞萎缩。
(2)染色镜检 将获得的心血做两份涂片,其中一份用甲醇固定2 min~3 min,用姬姆萨染色液染色30 min,然后镜检,油镜观察发现虫体呈紫红色;另外一份涂片自然干燥后用瑞氏染液染色3 min~4 min,然后加等量的PBS液再染色4 min左右,最后用流水冲片,镜检,发现红细胞为淡红色,虫体为淡蓝色。
3、动物回归试验
取病鸡血液,肌肉接种10只未经过相关免疫的青年鸡,接种剂量为0.5 mL/只,5 d后相继发病,翅下静脉采血,均检出了附红细胞体。