1、猪精液冷冻技术操作流程
1.1 颗粒法冻精的冷冻程序
1)新鲜精液在常温、等温条件下，用不含甘油的I液稀释，然后平衡0.5～2h;
2)缓慢降温至15℃维持4h，再从15℃经1h降至5℃;
3)用等温的含甘油的II液进行稀释。
4)稀释后用液氮熏蒸法制作冻精颗粒。
利用广口液氮罐，以聚四氟乙烯板作为冷冻面，冷冻面与液氮面距离为1～2cm，待冷冻面充分预冷后，用预冷的滴冻管在氟板上连续等量滴冻。其始冻温度为-110～-125℃，滴冻时间控制在60s内完成，加盖熏蒸平衡3～4 分钟后，浸入液氮中保存。
1.2 细管法和塑料袋法的冷冻程序
1)新鲜精液在室温下，用稀释液将精液按比例等温稀释，然后平衡0.5～2h。
2)将精液移入15℃条件下降温平衡3h。
3)在15℃条件下离心(800g，10min), 加入无甘油的I液，缓慢降到5℃，平衡2h，加入含甘油的II液，然后分装。
4)程序冷冻仪冷冻：初始温度为5℃，以3℃／min从5℃降到-5℃，再于-5℃条件下保持1min结晶，然后以50℃／min从-5℃降到-140℃，然后投入液氮保存。
5)液氮熏蒸冷冻：在广口液氮罐内，与液氮面距离5cm处，熏蒸20分钟，然后投入液氮保存。
2、影响猪精液冷冻效果的因素
2.1 个体的影响
个体对精液冻后效果影响极大。应用限制性片断长度多态(AFLP)分析控制精子冷冻能力的基因，没有发现差异。差异的机制仍需要继续研究
2.2 冻前处理的影响
冷休克：可能原因是质膜中特别的组成成分所致。猪精子膜磷脂酰胆碱的含量较牛低，而磷脂酰乙醇胺和鞘磷脂的含量高胆固醇/磷脂的比例低，且胆固醇的分布不对称，外膜的分布量大于内膜离心：800g，10min。
2.3 冷冻保护剂的影响
常用：甘油、二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)、木糖醇、乙酰胺、阿东糖醇等。
作用过程：首先，冲淡溶液中溶质盐浓度，细胞摄入盐量减少，由抗冻剂代替；其次抗冻剂进入细胞，改变了胞内过冷状态，使胞内压接近胞外压，降低了细胞脱水皱缩程度和速度；抗冻剂进入细胞，缓解了精子在解冻时的渗透性肿胀引起的损伤。
