“高热病”病猪细菌性病原的分离鉴定（一）

猪“高热病”即猪高热综合征，是一种发病率和病死率均较高的疾病，主要发生在育成期猪和部分母猪^[1]，病猪临床主要表现为体温升高，精神沉郁，食欲不振或废绝，呼吸困难，喘气，部分猪伴有皮肤发红变紫等症状，少数毛孔有出血点病原主要为多种病毒和细菌、寄生虫的混合感染和继发感染^[2]，包括猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪链球菌(SS)^[3]、副猪嗜血杆菌(HP)、大肠埃希菌、沙门菌、巴氏杆菌^[4]、猪丹毒杆菌等细菌的混合感染。

2006年－2007年，济宁市各县市的许多猪场，生长育成猪和部分母猪、保育猪暴发猪“无名高热病”，大部分发病猪场患猪发病率在40%以上，病死率高达50%～70%。对济宁市3个正规养猪场(定为A点),3个小规模养殖户(定为B点),7个散养农户(定为C点)共2 760头猪进行了流行病学调查，统计出发病率；并对混合感染和继发感染猪“高热病”的几种细菌进行了检测、鉴定；同时对猪“高热病”细菌多重感染状况进行统计与分析。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　被检材料　取猪“高热病”中病死或濒死架子猪、母猪血液、组织器官共146份，送实验室进行诊断。

1.1.2　培养基及主要试剂　普通营养琼脂培养基、鲜血琼脂平板培养基、血清肉汤培养基、普通肉汤培养基、麦康凯琼脂培养基和生化试验用培养基、生化反应管，均购自上海医学化验所试剂厂，按参照文献[5]制备。

1.1.3　实验动物　昆明小白鼠，体重20 g～23 g，为清洁级，雌雄各半，购自山东泰邦生物有限公司。

1.1.4　仪器设备　显微镜及其它仪器均由山东农业大学微生物实验室提供。Anke TGL-16B型台式离心机，购自上海安亭科学仪器厂。

1.2　流行病学调查

2006年、2007年夏季猪“高热病”普遍流行，危害十分严重。2007年7月中旬，分别对本市大部分县市区不同养猪场(户)进行流行病学调查，对病猪的发病情况、临床症状进行实地考查了解，并对濒死猪和死亡猪进行剖检观察，记录主要病理变化。

1.3　病原学检查

1.3.1　细菌的分离培养　分别采取死亡猪的内脏器官，在鲜血琼脂平板及普通营养琼脂平板上进行划线分离，37 ℃培养24 h～48 h，挑选单个菌落进行纯培养。将获得的纯培养物再进行下述试验检查。

1.3.2　细菌形态与培养特征观察　将分离菌分别接种到鲜血琼脂平板、普通营养琼脂平板上，37 ℃培养24 h～48 h，观察菌落特征。纯培养物分别做革兰氏染色，观察菌体形态特征。

1.3.3　细菌生化试验　按参照文献[6]方法，取纯培养物，分别接种于细菌生化特性鉴定用的培养基中，进行氧化酶、硝酸盐(还原)、糖(醇及苷)类代谢、H₂S、柠檬酸盐(利用)试验等较系统的生化特性测定。

1.3.4　人工感染试验　将分离的各菌株在普通肉汤培养基中，37 ℃培养12 h～18 h后，腹腔接种小白鼠(5只/株)，每只接种0.2 mL(菌液浓度均调整到2×10¹⁰cfu/mL)，无菌生理盐水作对照，接种后每天观察记录发病死亡情况，同时从发病死亡的小鼠中再分离细菌，从中筛选出致病力最强的菌株。

1.3.5　药敏试验　将分离的菌株，分别采用琼脂扩散法(K-B法)进行常用抗菌类药物的敏感性试验，37 ℃恒温培养18 h～24 h后取出，以抑菌圈直径作为判定指标，判断标准依据美国临床标准委员会(NCCLS)手册2005版。

1.3.6　细菌多重感染的状况统计及分析　对146份病料样品均采用上述方法进行病原学检查，统计所分离细菌的分离率，并分别统计单独感染、二重感染、三重感染和四重感染率。

2　结果

2.1　流行病学调查

病猪主要表现为持续高热40 ℃～42 ℃，食欲下降，精神不振，采食量下降或食欲废绝，被毛粗乱；皮肤表现出严重出血，呈紫红色，有斑块状；猪群便秘，粪便秘结，呈球状，部分猪拉黄绿色稀便，尿黄而少、混浊；出现严重的腹式呼吸，气喘急促；部分母猪在怀孕后期出现流产，死胎，弱仔和木乃伊；病程稍长的病猪全身苍白，出现贫血现象，持续性消瘦，多种抗生素治疗无效果，最后全身抽搐而死。2006年－2007年，猪“高热病”在济宁大部分地区猪群中暴发，主要危害架子猪、生产母猪。在济宁不同地区，其发病率、病死率高低不等(表1)。

表1　各场(户)“高热病”病猪发病和死亡情况

Table 1　The state of death and morbility of swine high fever in different farms