1华北制药天星有限公司质检部,河北承德 067000;2.河北工程大学农学院,河北邯郸 056021)
1 材料与方法
1.1实验用菌种
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌由河北工程大学农学院预防医学实验室提供。链球菌、绿脓杆菌由中国农业大学动物医学院病理研究室惠赠。
1.2 药品准备
大黄、黄芩、黄柏、大青叶购于邯郸市医药大厦,羊胆汁由河北省张北县食品公司提供,西红柿从菜市场购得。
1.3 培养基的制备
除营养肉汤是按常规制备外,其他如营养琼脂、SS琼脂都为市售。无菌羊血清及脱纤绵羊血由河北工程大学农学院预防医学实验室提供。
1.4 细菌培养
将大肠杆菌接种于营养肉汤、营养琼脂和SS琼脂,将金黄色葡萄球菌接种于含15%氯化钠的营养肉汤及营养琼脂平板,将链球菌接种于血清肉汤及血液琼脂平板,绿脓杆菌接种于营养肉汤及营养琼脂,然后置于37℃恒温箱中培养24小时。
1.5 单味中药的处理
称取大黄100克,切细磨碎,加5~6倍水,加热煮沸30分钟,过滤。药渣再加同量水加热煮沸30分钟,过滤。将两次滤液合并,蒸发浓缩到250毫升,备用。黄芩、黄柏、大青叶用同样方法处理。
西红柿汁的制作:将500克西红柿洗净、晾干,置于无菌操作台上经紫外线灯照射1小时,然后在无菌操作台内剥皮、切块、放入豆浆机中绞碎,再用无菌纱布过滤,收集滤液备用。
1.6 药敏片的制作
1.6.1纸片的准备
将购买的新华Ⅰ号定性滤纸用打孔器打成直径6毫米的圆形小纸片,然后每50小片放入一个清洁干燥的青霉素空瓶内,瓶口以单层牛皮纸包裹,15磅压力20分钟高压灭菌后,放在37℃恒温箱中数天,使完全干燥后备用。
1.6.2药敏片的制备
取大黄、黄芩、黄柏、大青叶的制备液,西红柿汁及羊胆汁各0.25毫升分别滴加到装有50片小纸片的青霉素小瓶内,并翻动纸片以使各纸片充分浸透药液。在瓶上贴好标签,并将瓶放入37℃恒温箱内过夜,干燥后进行密封,待用。
1.7药敏试验
从培养各细菌的培养基上挑取本菌,然后接种于同一类型的培养基上,再用灭菌的小镊子夹取己作好的各药物的药敏片。分别密贴于上述的培养基表面并作好标记。将贴好药敏片的各细菌培养基放置于37℃恒温箱中,放置时要使贴纸片的平板底部在下,培养24小时后观察结果。
药敏试验判断标准:抑菌圈直径(毫米)大于20以上,为极敏感;抑菌圈直径介于15~20间,为高敏感;抑菌圈直径介于10~14间,为中度敏感;抑菌圈直径小于10,为低敏感。
2结果
药敏试验结果表明对链球菌及绿脓杆菌,大黄、黄芩、黄柏、大青叶、西红柿汁及羊胆汁均表现为中度敏感性;对于大肠杆菌,黄芩、西红柿汁表现为高敏感性,其余表现为中度敏感性;对于金黄色葡萄球菌,大黄、黄芩、西红柿汁表现为高敏感性,其余表现为中度敏感性。结果表明,大黄、黄芩、黄柏、大青叶、西红柿汁及羊胆汁对链球菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有较强的抗菌作用。