夏天无为罂粟科植物夏天无Corydalis decumbens (Thunb.)Pers.的干燥块茎。2005版《中国药典》一部收载的含量测定方法为采用高效液相色谱法,以原阿片碱为指标成分。文献报道的夏天无及其制剂的含量测定方法主要为高效液相色谱法和薄层扫描法。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》夏天无含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺8ml,冰醋酸30ml,加水稀释至1000ml)(18:82)为流动相,检测波长为289nm;理论板数按原阿片碱峰计算应不低于4000。
供试品溶液的制备:取本品粗粉约0.5克,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,取续滤液,即得。
文献报道的HPLC法,常用的实验条件总结如下:
①岛津高效液相色谱仪;色谱柱为Shim-Pack CLC-ODS C18(6.0mm×150mm );流动相为乙腈-甲醇-0.2%磷酸溶液(150:100:750),用三乙胺调节pH值至3;检测波长282nm;柱温40℃;外标峰面积法计算含量。供试品溶液的制备:样品加入浓氨试液与氯仿适量, 放置过夜, 加热回流→残渣用10%醋酸溶解→乙醇定容。(顾孝红等“反相高效液相色谱法测定夏天无中原阿片碱的含量”,时珍国医国药2002 年第13卷第10期)
②日本岛津高效液相色谱仪;色谱条件:Hypersil ODS 填料色谱柱(4.6×250mm);柱温:40 ℃;流动相:甲醇-0.1%三乙胺溶液(65:35);检测波长:290nm。样品以浓氨试液和氯仿的混合溶液为溶剂回流提取。(李向阳等“HPLC法测定夏天无胶囊中原阿片碱的含量”中药新药与临床药理,2005年7月第16卷第4期)
③Waters高效液相色谱仪;色谱柱: Supelcosil LC-18-DB柱(5μm, 4.6×250mm);流动相:甲醇-乙酸钠/ 冰乙酸缓冲溶液(75:25,pH5.0);检测波长:285nm;柱温:室温。供试品溶液制备:乙醇水浴回流→残渣加水使溶解,摇匀,加氨试液调pH值约为10→乙醚提取→用饱和氯化钠溶液洗涤,弃去水层→乙醚提取液回收乙醚,残渣用甲醇溶解,定容。(李晓蒙等“HPLC 测定夏天无中原阿片碱和延胡索乙素含量”中成药,2002年3月第24卷第3期)
二、薄层扫描法
常用的薄层条件一般为二次展开,双波长扫描,如罗跃华等用薄层扫描法测定夏天无中原阿片碱的含量(中草药,2000年第31卷第9期):采用CS2930型双波长薄层扫描仪(日本岛津)。层析条件:吸附剂为硅胶GF254,展开系统A:环己烷-异丙醇(40:8),在氨蒸气饱和层析缸内;B:环己烷-醋酸乙酯-二乙胺(80:15:5)。采用二次展开技术进行展开, 先以A系统展开约8cm、取出, 立即用热风挥干溶剂, 置五氧化二磷的干燥器中2h,再以B系统展开约9cm。扫描条件:测定波长为288nm,参比波长为320nm, Sx=3,狭缝1.2mm×1.2mm,反射法锯齿形扫描。制备样品时,选择氯仿为提取溶媒。少量氨水浸渍过夜后, 使样品细胞溶涨, 生物碱游离出来, 便于提取, 再用索氏提取6h可被提取完全。