秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchoophylla Hance、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb.、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh. 或宿住白蜡树Fraxinus stylasa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法,以秦皮甲素和秦皮乙素为对照测定其含量。文献报道的常用的含量方法为高效液相色谱法、薄层扫描法和毛细管电泳法等。
一、 高效液相色谱法
2005版《中国药典》秦皮含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1磷酸溶液(12:88)为流动相,检测波长为334nm。理论板数按秦皮乙素峰计算应不低于2000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,加热回流60分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
文献报道的同时测定秦皮甲素和秦皮乙素的含量,主要方法如:徐海波等测定秦皮配方颗粒中秦皮甲素、秦皮乙素的含量。采用LC210A TVP高效液相色谱仪,SPD210AVP 紫外检测器,N22000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。色谱柱为Kromasil-C18 (中国科学院大连化学物理研究所);流动相为甲醇-水-冰醋酸( 31:69:0.4);检测波长335nm;柱温(30±1)℃。样品用甲醇超声处理。
左月明等测定了不同地理种源秦皮的树皮及叶中秦皮甲素和秦皮乙素的含量。采用JASCO UV-1575 紫外检测仪(日本),JASCO PU-1580高效液相泵(日本)。色谱柱为Waters Novapak C18 色谱柱(4.6mm×250mm,4μm);流动相为乙腈-水(15:85);室温;检测波长348nm。药材用90%乙醇回流提取。
单独测定秦皮中秦皮甲素的含量时,常用的流动相为甲醇-水-磷酸、甲醇-水—冰醋酸等系统;检测波长为335±3nm、254nm等。
单独测定秦皮中秦皮乙素的含量时,常用的流动相为乙腈-磷酸溶液,检测波长为334±2nm。
二、 薄层扫描法
采用此方法一般测定秦皮及其制剂中秦皮甲素的含量,常用的薄层条件为:硅胶G板;展开剂为氯仿-甲醇-甲酸-水(30:10:1:3)、氯仿-甲醇-水(30:10:3)、正丁醇-氯仿-甲苯-甲酸(8:1:1:1)等。扫描条件为:单波长反射法锯齿扫描,测定波长λ= 330nm、336nm、345nm等。样品以甲醇或乙醇为溶剂,采用超声或回流方法提取。
三、 极谱法
门孝英等建立了中草药秦皮中秦皮甲素的二阶导数示差脉冲极谱定量分析方法。采用DP-A型微分脉冲极谱仪,实验中设置预置电压-0.050V,扫描速度250mV/s,电流灵敏度10μA/ V , 脉冲振幅40mV。秦皮甲素在乙醇-2mol/ L氯化锂-水( 体积比2:1:5 )的底液中,于- 1.703 V (vs Ag/ AgCl) 处出现一良好的二阶导数示差脉冲极谱峰, 其峰幅值与秦皮甲素在0.2~ 1.6mmol/L范围内呈非常显著的线性关系,检测下限为50nmol/L 。