瓦松为景天科植物瓦松Orostachys fimbriatus(Turcz.)Berg.的干燥地上部分。2005版《中国药典》收载的含量测定方法是高效液相色谱法,以槲皮素、山柰素为指标成分。现分别介绍槲皮素、山柰素的含量测定方法。
一、 槲皮素
槲皮素的含量测定方法,文献报道较多的为高效液相色谱法。
⑴高效液相色谱法
2005版《中国药典》瓦松含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.5%磷酸溶液(47:53)为流动相;检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于4000。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约1克,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4:1)混合溶液50ml,密塞,称定重量,置水浴中回流1小时,立即冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
文献报道的HPLC方法,流动相一般为甲醇-0.4%磷酸溶液或乙腈-0.4%磷酸溶液。检测波长一般为360nm。
台海川等测定傣药移衣中槲皮素的含量。采用岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪,岛津SPD-1OAvp紫外检测器,岛津Class-VP6.12工作站。C18柱为固定相,甲醇-0.4%磷酸为流动相,梯度洗脱,360nm为检测波长,柱温为30℃。样品处理:氯仿索氏提取,弃去氯仿,药渣加甲醇回流提取,提取液蒸干,残渣加甲醇-25%盐酸(4:1)混合液25mL,回流提取。槲皮素在0.586~11.72μg范围内,峰面积与其浓度呈良好线性关系(r=O.9999),平均回收率为99.52%,RSD=1.2%(n=3)。
张文斌等测定新疆圆柏叶中槲皮素的含量。采用HPLC-4A,SPD-2AS紫外检测器(日本岛津制作所)。色谱柱:岛津HRC-ODS(250mm×46mm),流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(45:55),流速:1.0mL/min,检测波长:254nm,灵敏度:0.08AUFS。样品甲醇超声提取。
祝莉莎等测定罗布麻霜中水解产物槲皮素的含量。采用ThenI1o Separation Products型高效液相色谱仪(美国热电公司):P2000型泵系列,UV1000紫外检测器。色谱柱:Hypurity Cl8(4.6 mmx250mm,5μm);流动相:乙腈-水(25:65);检测波长为360nm。柱温35℃,流速为1.0 mL/min,理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500。槲皮素浓度在8.63~43.16μg/mL范围,峰面积与浓度线性关系良好。样品处理:甲醇-25%盐酸溶液(4:1)水浴加热回流提取。
田刚等法测定野马追中槲皮素的含量。采用Waters510液相色谱仪,Waters 486紫外检测器,WDL-95色谱工作站。色谱柱为Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm),柱温30℃;流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸(24:76);流速1.0ml/min,检测波长360nm。样品处理:甲醇超声提取→25%盐酸水浴回流水解→离心,过滤。槲皮素在5.625~162 mg/L线性关系良好(r=1.000O),平均回收率为98.73%,RSD=1.27%。
⑵毛细管电泳法
吕元琦等测定了复方鱼腥草片中绿原酸和槲皮素的含量。采用1229高效毛细管电泳仪(北京新技术研究所)配有固定波长紫外检测器;检测波长254nm,未涂层弹性石英毛细管柱(50 m×50μm,河北永年光导纤维厂),工作电压l6kV,静压力进样(高度10cm,时间6s);背景电解质为pH 8.5的30mmol/L硼砂缓冲溶液(用0.2mol/LHAc和0.1mol/L NaOH调pH)。15min内实现了两种分析物质的良好分离。绿原酸和槲皮素峰高和质量浓度分别在0.05~0.80g/L和0.05~1.00g/L范围内成良好线性。基于迁移时间和峰高的重复性(RSD)分别为:绿原酸1.91%和4.32%;槲皮素2.30%和3.18%。绿原酸和槲皮素的检出限(S/N=3)分别为0.014g/L和0.015g/L。
⑶薄层扫描法
崔宁等测定了扁蓄及其制剂中槲皮素含量。采用GF254薄层板,以甲苯-甲酸-醋酸乙酯-正己烷(2;0.2:1.5;0.2)为展开剂,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,置紫外光灯(365nm)下检视,槲皮素斑点显黄绿色斑点。测定波长412,参比波长75Onm,sx=3,狭缝0.4mm×0.4mm。邹节明等测定了消渴降糖胶囊中槲皮素的含量。硅胶G薄层板,以甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(80:5:7:1)为展开剂,于38Onm波长处进行扫描测定。
二、 山柰素
孙斌等测定了沙棘籽渣中中槲皮素、山奈素、异鼠李素的含量。采用Kromasil C18(4.6mm×250mm,5mμ)色谱柱(Eka chemicals AB S-445 80 Bohus,Sweden),流动相为甲醇-水(60:40),柱温为室温,检测波长为368nm,流速为1.0mL/min。
刘耀明等对山蜡梅颗粒中的槲皮素及山柰素进行了含量测定。色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂, Nova-pak Cl8(3.9mm×150mm,4μm);流动相:甲醇-0.5%磷酸(45:55);流速:1mL/min;柱温:35℃;检测波长:365nm;理论塔板数按槲皮素峰计算不低于1500。山柰素在2.16μg/mL~34.60μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),. 平均回收率为97.75%,RSD为1.53%。样品处理:甲醇回流提取,提取液蒸干,加水3OmL,加冰醋酸调pH3~4,加醋酸乙酯振摇5次。
三、 同时测定槲皮素和山柰素
余佳红等以超临界流体革取(SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山柰素,以胶束电动毛细管色谱法(MECC)测定这两种成分的含量。采用正交设计法考察SFE提取工艺,SFE条件:压力42mPa;温度60℃:静态萃取时间4min{动态萃取体积4mL;改性剂0.2mL乙醇。MECC条件:空心熔融石英毛细管柱(55cm×75μm);缓冲液为磷酸二氢钠-硼砂=25-6.25mmol/L(pH8.5)SDS 35mmol//L;检测波长254nm。结果:SFE时改性剂对萃取效率的影响最大;MECC以肉桂酸为内标,在21.2~106.0μg/ml和2O.O~100.0μg/m1范围内,槲皮索和山奈素均呈良好的线性关系和重现性。4O,60和80μL槲皮素的加样回收率分别为93.87%,94.02%和94.10%;4O,60和80μL山奈素的加样回收率分别为94.5O%,94.17%和94.25%。
张集盘等同时测定金钱草中槲皮素和山奈素两种黄酮含量的反相高效液相色谱法,用于金钱草质量标准的研究。采用美国安捷伦公司高效液相色谱仪Agilentl100 Series,配置四元泵,紫外可见光检测器,柱温箱,在线真空脱气泵,色谱工作站等。色谱柱:Alltima Cl8柱(150mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水-磷酸(500:500:1)(0.45μm微孔滤膜滤过,用前超声脱气);检测波长:360nm;柱温:30℃:流速:1.0ml/min。样品处理:甲醇超声提取,用中速分析滤纸滤过,续滤液用石油醚萃取,合并下层液,用乙酸乙酯-水(15:lO)混合液萃取,合并萃取液,回收乙酸乙酯,残渣加甲醇溶解。