三七为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen的干燥根及根茎。2005版《中国药典》一部收载的含量测定方法是高效液相色谱法,以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1为对照品。对于前两者的含量测定方法以及薄层扫描法,我们已在人参和人参叶中有所介绍,现主要是介绍同时测定几种皂苷含量的方法。
⑴2005版药典三七含量测定项:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表进行梯度洗脱;检测波长为203nm.理论板数按人参皂苷R1峰计算应不低于4000。
0-12min:A19%,B81%;12-60min:A19→36,B81→64
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.6克,精密称定,精密加入甲醇50ml,称定重量,放置过夜,置80℃水浴上保持微沸2小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
⑵其它分析条件,如:
黄永焯等采用HPLC/ELSD法结合固相萃取测定三七中人参皂苷Rg1 、Rb1和三七皂苷R1的含量。Waters 515高效液相色谱仪,Alltech 500蒸发光散射检测器,Waters Millennium, 色谱工作站。安捷伦AccuBONDIIODS柱(500mg,6mL)。大连伊利特Hypersil氨基柱(200 mm×4.0 mm,5μm) ;流动相: 乙腈-异丙醇-10mmol/L醋酸铵水溶液(冰醋酸调pH5.0)(75:20:5);流速:0.6mL/min;柱温:室温;ELSD雾化器温度:55℃;氮气流量:2.3 L/min。作者还用同法测定了复方丹参滴丸中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量,结果方便可行。
潘桂湘等采用高效液相色谱法,分别以乙腈-0.05%磷酸(19:81)为流动相, 于203nm处检测三七皂苷R 、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re;以乙腈-水(33:67)为流动相,于203nm处检测人参皂苷Rb1。HP1100高效液相色谱仪,G1311A-四元泵,G1322A-脱气机,G1316A-柱温箱,1314A-UV可变波长检测器,HPRev.A.0501化学工作站。Hypersil C18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm) ,Sep-Pak C18固相萃取小柱(6Oμm,12mL/kg)。
沈国芳等采用RP-HPLC法,线性梯度洗脱测定血栓通注射液中4种皂苷的含量。Agilet 1100高效液相色谱仪,配置4元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、可变波长紫外检测器、柱沮箱和ChemStation工作站。Agilet CI8分析柱(4.6mm×250mm);流动相:A相为0.02%磷酸水溶液,B相为含0.02%磷酸的80%乙腈水溶液,线性梯度洗脱程序:0min(90:10),15min(74:26),39min(52:48),55min(O:100);流速1 mL/min ;检测波长203nm;柱温30℃。
文献报道的HPLC法测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量,所用流动相系统多为乙腈-磷酸、乙腈-水、甲醇-水等,且多为梯度洗脱。因三者均为四环三萜类皂苷,在紫外区为末端吸收,与一些常用的有机溶剂的截止波长接近,影响测定。使用紫外低波长检测,会给测定带来一定困难。文献报道用ELSD检测器效果较好。ELSD为一新型通用检测器,其信号响应与被测物的质量成正比,而不依赖于被测物的光学特性及官能团,理论上可用于挥发性低于流动相的任何组分的检测。它对无紫外吸收或为紫外末端吸收的物质如糖类、皂苷类、甾类等有较好的响应。