摘要：目的对注射用头孢唑林钠中高分子杂质进行分离分析。方法采用以Sephadex G-10为填料的凝胶色谱系统，以自身对照外标法对头孢唑林钠中高分子杂质进行定量测定。结果缔合物在Sephadex G-10凝胶色谱系统中的色谱行为和高分子杂质一样，都在Kav=0处表现为单一的色谱峰，可精确对高分子杂质峰进行定量。结论方法简便，结果可靠。
关键词：注射用头孢唑林钠；高分子杂质；凝胶色谱
头孢唑林钠适用于治疗敏感细菌所致的中耳炎、支气管炎、肺部感染、皮肤软组织感染、骨关节感染、败血症、感染性心内膜炎、肝胆系统感染及眼、耳、鼻、喉科等感染；在临床上广泛应用。β-内酰胺抗生素中的高分子是引发β-内酰胺抗生素速发型过敏原，故研究高分子杂质是抗生素药物分析的重点之一。
1 仪器与试剂、样品
BP9300-B高分子杂质分析仪(254nm紫外检测器，北京汇捷通新技术有限公司)；D100B数显定时蠕动泵(上海青浦沪西仪器厂)；N-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。
头孢唑林(批号：0421-9603，含量99.3％，中国药品生物制品检定所)；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠、磷酸、氢氧化钠均为分析纯；水为二次重蒸馏水；葡聚糖凝胶(Sephadex)G-10、蓝色葡聚糖2000均为Pharmacia公司产品。
注射用头孢唑林钠(批号：030903、030904、03O905，规格：0.5 g，江苏华源药业有限公司)；注射用头孢唑林钠(批号：030447、030448、030449，规格：0.5 g，上海先锋药业公司)。
2 色谱条件
用葡聚糖凝胶G-10(40-120)为填充剂；玻璃柱内径1.5cm；床体积60ml；流动相A为0.01mol/L磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠2.19 g和磷酸二氢钠0.54 g，加水1000 ml溶解，调节pH至7.0)；流动相B为O.O1％十二烷基硫酸钠溶液；流速为1ml/min；检测波长为254 nin；进样量200μl。
3 溶液配制
3．1 对照品溶液的配制
取头孢唑林对照品25mg，精密称定，置250 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。
3．2 供试品溶液的配制
取本品500mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀(临用配制)。
4 方法和结果
4．1 系统适用性试验
以流动相A为流动相。用1mg/ml 蓝色葡聚糖2O0O溶液进样200μ1进行测定，理论塔板数以蓝色葡聚糖2O0O峰计算为2495，拖尾因子为1.029。
以流动相B为流动相。取对照品溶液，反复进样200μl，共5次，峰面积的相对标准差为0.5％。
4．2 头孢唑林缔合峰测定
取对照品溶液200μl注入色谱仪，以流动相B为流动相绘制色谱图。
4．3 头孢唑林高分子杂质的测定
取供试品溶液200μl注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定。
4．4 以头孢唑林缔合峰作为自身对照的对照品峰响应指标测定供试品中高分子杂质的峰响应指标，按外标法计算，即得供试品中的高分子杂质含量。
4．5 精密度试验
精密吸取两厂家各一批号供试品溶液200μl(临用配制)，分别重复进样5次。
4．6 重复性试验
分别取两厂家同一批号的6个供试品溶液(临用配制)，各精密吸取200μl，分别进样，同法测得峰面积值，计算注射用头孢唑林钠产品中高分子杂质的含量和相对标准偏差。结果表明，同一批号的6个供试品溶液中高分子杂质的含量相差不大：江苏华源药业有限公司RSD为2.2％；上海先锋药业公司RSD为2.4％。
4．7 稳定性试验
精密吸取两厂家各同一批号供试品溶液200μl，每隔2小时进一次样，同法测定峰面积值，每一批号共进样测定5次，计算注射用头孢唑林钠中高分子杂质的含量和相对标准偏差。8小时内共5次测定。
4．8 注射用头孢唑林中高分子杂质含量的测定
精密吸取两厂家各3个批号供试品溶液200μl，分别进样，同法测得峰面积值，计算注射用头孢唑林中高分子杂质的含量。
5 讨论
5．1 在特定条件下，β-内酰胺类抗生素可以缔合形成表观分子量较大的缔合物，缔合物在Sephadex Gl0
凝胶色谱系统中的色谱行为和高分子杂质一样，都在Kav=0处，表现为单一的色谱峰。
5．2 采用自身对照外标法以头孢唑林对照品为对照，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标，再改变色谱条件，测定供试品中的高分子杂质峰响应指标。方法简便、快速，且自身对照外标法不需专门制备标准品，又可同外标法一样精确对高分子杂质峰进行定量，结果直观。
5．3 对两个厂家6个批号的产品进行高分子杂质测定，用自身对照外标法进行定量，其含量均在0.22％～0.24％范围。
5．4 从稳定性试验结果看，注射用头孢唑林钠溶液放置时间不宜过长，其高分子杂质含量随着时间的延长会越来越高。
