本研究的主要目的是调查本病的临床症状,统计实验室检验结果,分析可能的诱病因素,提出合适的治疗方法,观察相应的治疗效果。
1 材料与方法
1.1 材料 沙保劳氏琼脂(杭州天和微生物世纪有限公司,原浙江省军区后勤部卫生防疫检验所生 产),科玛嘉念珠菌显色培养基(法国CHROMagar公司生产),培养皿、接种环、生物显微镜,电热恒温培养箱、10% KOH、乳酸苯酚棉蓝。
1.2 实验动物 中国农业大学动物医学院临床系动物医院的收治动物:(1)尿液真菌培养阳性。(2)收治期间在尿道之外其他系统无真菌感染(皮肤真菌培养结果阳性病例除外)。(3)假如通过尿液或尿沉渣显微镜检查发现真菌成分,而使用相应的真菌培养基培养结果为阴性,则病例将被剔除。
1.3 病例记录 包括动物个体的资料,病史,并发疾病,1个月之内的治疗情况(尤其是抗生素、激素、抗真菌药的使用),临床症状,实验室常规检查,真菌的分离培养结果,体外药物敏感性试验结果,治疗方案与治疗效果。
1.4 病料的处理 尿液的采集(膀胱穿刺)、接种均遵循无菌操作原则,24 h内将尿样离心,取尿沉渣在37℃条件下于沙保劳氏培养基上培养。连续观察与记录真菌的生长状况1周。
1.5 真菌鉴定 镜检,对照真菌图谱进行鉴别,同时使用科玛嘉显色培养基进行鉴定。
2 结果
2.1 流行病学 在研究调查的3年期间中,每年的真菌性尿道感染(FUTI)病例数表现出逐年上升的趋势。35例真菌性尿道感染的病例中有24例发生在较为寒冷的月份, 11月份和12月份发病率最高。
2.2 临床症状 犬主要表现为排尿困难,发热,精神沉郁,食欲减退,嗜睡,尿频,血尿,体重下降与全身性衰竭。猫主要表现为食欲减退,体重下降,发热,尿频,排尿困难,血尿与机体的全面衰竭。
2.3 实验室检验结果 酸性尿(尿pH值小于6.5),蛋白尿,血尿,糖尿,脓尿与尿液中发现真菌成份是尿常规分析中最常见的不正常的指标。
2.4 真菌分离与培养结果 从患病动物的尿样中共分离培养出7种真菌。35个动物的尿样中有33个(94%)分离培养出单一菌种。一只病犬的尿样中分离出白色念珠菌与热带念珠菌。一只病猫尿样中分离培养出白色念珠菌与克柔氏念珠菌。白色念珠菌是本研究中分离培养出的最常见的菌种。
2.5 药敏试验 10个菌株的真菌(5个犬尿样,5个猫尿样)被进行了体外药物敏感性测试,其中白色念珠菌3株,热带念珠菌3株,克柔氏念珠菌1株,季也蒙念珠菌1株,新生隐球菌1株与深红酵母1株。药敏试验中使用氟康唑,伊曲康唑,酮康唑,5氟嘧啶与两性霉素B药物的商业药敏试纸条(Etest药敏纸条)。8株对氟康唑敏感,6株对5氟胞嘧啶敏感, 5株对伊曲康唑敏感,4株对两性霉素B敏感,4株对酮康唑敏感。
3 讨论
人们通常不把真菌考虑为致病菌,而把细菌经验性的认为是所有尿路感染的病原菌,所以以前研究出的真菌尿路感染的发病率实际上远远低于真实的感染发病率。近些年长期滥用广谱抗生素、免疫抑制剂(糖皮质激素或抗肿瘤药物);不正确的插管性治疗都影响机体的正常抵抗力或引入感染病原,从而增加真菌感染的机会。在本研究进行期间,每年的真菌性尿道感染均呈逐年上升的趋势。我们认为,这与北京地区大量老年多病期动物种群的特殊性有关。老年动物机体整体代谢、免疫能力、组织修复能力均下降,这些将会潜在的引发条件性致病真菌感染。
有些素质相对较差,只注重经济效益的兽医不考虑用药梯度,超量长时间使用抗生素。导致消化道与体表的细菌与真菌共生的微生物菌群的平衡被打破,细菌对真菌的拮抗作用大大减弱,大量繁殖的真菌既增大了动物被感染原污染的几率,也增强了真菌自身的致病能力——毒力。在本研究中,17只动物(49%,10只犬,7只猫)在先前的诊断与治疗中进行过插管导尿或留置导尿管,真菌带入泌尿道的可能性增加。动物夏天饮水量上升而排尿频繁,大量尿液冲刷尿道,使许多细菌或真菌难以附着在黏膜上,减少了感染机会,而冬天则正相反。健康的动物尿液中,通常不能找到真菌的成分。典型的尿道真菌感染可以引发尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎,甚至是败血症。已报道的可以感染动物尿道的真菌种有:念珠菌、球拟酵母菌、隐球菌、芽生菌、毛孢子菌、曲霉菌、组织胞浆菌与红酵母菌。在本论文调查研究中共有7种不同的真菌被从动物的尿样中分离出来。白色念珠菌是最常见的感染菌种。最近,人类的有关研究表明其他种类的机会致病菌对人类的感染率呈增多趋势,这与本研究中动物的表现相吻合。静脉输注两性霉素B可以快速清除真菌性尿道感染;但它对犬有很强的肾脏毒性。
此外这种药物极昂贵且需要较长时间的巩固用药。氟胞嘧啶有较低的毒副作用,但其抗真菌性较差,且在低剂量使用下,易出现耐药性。酮康唑与伊曲康唑透过肾脏后,在尿液中原形物的浓度很低。氟康唑常被用来替代氟胞嘧啶与两性霉素B而应用于人医临床。此药物分子较小,水溶性较好,蛋白结合能力比酮康唑与伊曲康唑要低。所以,可以很容易的通过肾脏而进入尿液中。在疗效上,氟康唑相对优于其他药物,此结果基本上与Pressler的研究相同。疗效的监控主要通过对尿样进行真菌培养来完成。依据本研究中得出的经验与其他研究中得出的结论,对于真菌感染的药物治疗应持续到连续两次尿真菌培养阴性结果之后(间隔1~2周)。