摘要:目的:为开发利用槐叶天然资源提供参考依据。方法:用紫外分光光度法测定了三种槐叶中芦丁的含量,采用510nm波长,相关系数r=0.9996,回归方程C=0.073A+0000。结果:国槐、刺槐、龙爪槐三种槐叶均含有一定量的芦丁,国槐为2.294%,刺槐为3.329%,龙爪槐为2.084%。结论:三种槐叶以刺槐中芦丁含量最高,具有一定的开发价值。
关键词:紫外分光光度法;槐叶;芦丁;含量测定
芦丁(Rutin)主要是从豆科植物槐(Sephora japonica L.)的花蕾中提取。近年来,随着芦丁的医药应用的广泛化,花蕾提取已远远不能满足市场所需。全国各地有着丰富的刺槐资源,龙爪槐也有部分种植。为了开发新的芦丁来源,本实验进行了,国槐(Sephora japonica L.)、刺槐(Robinia pseudoacacia L )、龙爪槐(Sophora iaponica L.f.pendula Loud.Arb.Brit)三种槐叶中芦丁含量的测定。采用紫外分光光度法。以期为拓宽芦丁的天然来源以及槐叶的开发利用提供参考依据。
1仪器与试剂
S54紫外分光光度计(上海棱光),超声波振荡提取器(昆山,KQ-500E);芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用),批号:0080-9705。所用试剂均为分析纯(AR)。三种槐叶采自泰山医学院院内,采摘时间为2003年5月16日,自然阴干。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 .
精密称取105℃ 干燥至恒重的芦丁对照品10mg,置100ml容量瓶中,用甲醇50ml溶解,蒸馏水定容至刻度,摇匀,即得。浓度为0.2mg/ml。
2.2 线性关系的考察
精密吸取对照品溶液0,1,2,3,4,5,6ml,置25ml容量瓶中,加蒸馏水至6ml,加5%亚硝酸钠1ml,摇匀,静置6分钟,加10%硝酸铝1ml,摇匀,静置6分钟,加4.3%氢氧化钠10ml,加蒸馏水至刻度,静置15分钟,用紫外分光光度计测定吸收度,检测波长510nm。以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,计算机显示回归方程为:C=0.073A+0.000,相关系数r=0.9996。表明浓度在0.008~0.048mg/ml范围内具有良好的线性关系。
2.3 样品的测定
精密称取各干燥槐叶10g,粉碎过40目筛,加50℃左右的热水100ml,硼眇少许,氢氧化钙水溶液调pH值8~9,超生波振荡提取2次,每次10分钟,超声波频率为500 W,提取温度为60℃,合并2次滤液,加浓硫酸调pH值3~4,放置4小时,移人冰箱中冷藏过夜。抽滤,水洗沉淀至中性,沉淀移人烧杯中,加无水甲醇100ml,水浴加热,待溶解后,加活性炭少量,继续加热10分钟,趁热过滤,滤液放冷至室温。精密量取样液10ml,置100ml的容量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密吸取3m1置25m1容量瓶中,按2.2项下方法测定吸收度,按干品计算三种槐叶中芦丁含量。
2.4 稳定性试验
取2号样液,按2.2项下测定吸收度,每隔15分钟测定1次,计算均值及RSD,结果表明样液在75分钟内稳定。
2.5 加样回收试验
取已测知含量的2号样液5份,分别加入芦丁对照品,按2.2项下方法测定,计算回收率及RSD。
3 讨论
3.1 目前对于植物中芦丁的含量测定方法主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法等常用方法。本实验曾经设计采用高效液相法,但提取液粘度大,难以处理成符合高效液相色谱法进样条件的样液。借鉴《中华人民共和国药典》2000年版紫外分光光度法测定槐米中芦丁含量的方法进行实验研究。并改煎煮法、索氏提取法为超声波提取法。通过对三种槐叶中芦丁含量的测定,证明该方法的系统稳定性、精密度及回收率符合要求,紫外分光光度法可以用于槐叶中芦丁的含量测定。
3.2 同一原植物来源不同的部位化学成分的种类以及含量、同一部位不同的采收时间同一种成分的含量均有不同。本实验研究结果表明国槐、刺槐、龙爪槐三种槐叶中均含有较高含量的芦丁,比文献报道的高,其中,以刺槐叶芦丁含量最高。
3.3 通过本实验,为进一步扩大芦丁的天然来源提供参考,同时,为进而开发槐叶制剂奠定一定的基础。