金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb. 的干燥花蕾或带初开的花。2005中国药典以绿原酸和木犀草苷为对照,采用高效液相色谱法测定其含量。
一、 高效液相色谱法
⑴2005版中国药典金银花含量测定项下:
绿原酸含量测定:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87)为流动相;检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于1000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过4号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率35KHz)30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5ml,置25ml棕色量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
木犀草苷含量测定:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.5%冰醋酸为流动相B,按下表进行梯度洗脱;检测波长为350nm。理论板数按木犀草苷峰计算应不得低于2000。
0~30分钟,流动相A10%→30%,流动相B90%→70%
供试品溶液的制备:取本品粉末(过4号筛)约3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率35KHz)1小时,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
⑵文献报道的HPLC法
HPLC法测定金银花及其制剂中绿原酸的含量时,文献报道的色谱条件,常用的流动相为乙腈-磷酸溶液、甲醇-1%冰醋酸等。如:
毛泉明等采用HPLC法测定银翘解毒片中绿原酸的含量。美国Warers高效液相色谱仪;481可变波长紫外检测器;730数据处理器;色谱柱:μ-Bondapar C18(3.9×300mm,lOμm);流动相:甲醇-1%冰醋酸(27:73);流速:O.8mL/min;检测波长:329nm;灵敏度:0.1AUFS;纸速:0.2cm/min;室温25℃;数据处理方法为外标峰面积法。
杨义芳等RP-HPLC法测定胖大海口含片中绿原酸和甘草酸含量。201型液相色谱仪(日本Waters公司);色谱柱YWG C18(300mm×4mm,粒径10μm);流动相绿原酸用甲醇-1%醋酸(23:77);检测波长326nm;流速0.9mL/min;定量方法用外标一点法。
张忠春等HPLC法测定金银花中绿原酸的含量。SP-8800高效液相色谱仪;SP-200型UV检测器;色谱柱:Sphersorb C18(10μ,4.6mm×250mm)流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87);流速1ml/min,检铡波长326nm;柱温30℃。
另外还有用其他条件的,如:熊英等用反相高效液相色谱法测定清解颗粒及金银花中绿原酸含量。采用岛津LC-10A高效液相色谱仪,SPD-10A紫外检测器,SCL-10 A系统控制器,C-R7A数据处理机,DGU-4A脱气机;色谱柱:岛津CLC-ODS 6.0×150mm(5μm);流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(15:85:0.7:0.15);流速:1.0mL/min;检测波长:326nm;柱温:室温。胡丽君等测定金银花及其制剂中绿原酸的含量时采用的也是此方法。
张丹等采用HPLC法测定金银花、茵陈及其1O种中成药中绿原酸的含量。日本岛津LC-3A液相色谱仪;SPD-1型紫外检测器;分析柱:Shimpack ODS(150mm×6mm);预柱:YWG C18(30mm×4.6mm);流动相:0.2mol/L NaH2PO4-甲醇(75:25,H3PO4调pH3.2);流速:1.Oml/min;柱温:35℃;检测波长:327nm。