地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块根。2005版《中国药典》收载的含量测定方法为高效液相色谱法,以梓醇为指标成分。现介绍梓醇的含量测定方法。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》地黄含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(1:99)为流动相;检测波长为210nm。理论板数按梓醇峰计算不低于5000。
供试品溶液的制备:取本品(生地黄)切成约5mm的小块,经80℃减压干燥24小时后,磨成粗粉约0.4g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,加热回流提取1.5小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液10ml,浓缩至近干,残渣用流动相溶解,转移至10ml量瓶中,并用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
文献报道的HPLC法,一般使用药典方法,也有以不同浓度的乙腈溶液、甲醇-乙腈等为流动相的。检测波长一般为210nm。现具体举几例。
汪程远等测定地黄及其制品中梓醇的含量。采用LC-6A液相色谱仪,SPD-6A型紫外检测器(日本岛津);以Inenrtsil ODS-2为固定相,水-乙腈(99.5:0.5)为流动相,检测波长210nm。梓醇的进样量在0.484~4.84μg时与峰面积呈良好的线性关系(Y=7.491×104X-3535×lO2,r=0.9999),平均回收率99.0%,方法精密度RSD=1.3%(n=6)。样品处理:地黄样品切成2mm小块,分别加水40mL,振摇浸泡3h后,超声提取20min,过滤,药渣再分别用水超声提取两次,滤液过滤后合并,定容。
朱坤福测定地黄颗粒剂中梓醇的含量时,地黄颗粒剂用甲醇35min超声提取梓醇,经稀释后作为供试品溶液。采用YWG-C1 8反相柱(4.6mm×250mm,5μm)。水-乙腈(100:2)为流动相,检测波长210nm。梓醇在0.20~1.00μg范围内,线性关系良好,回归方程:Y=11236.6+3174626X,r=0.9996,加样平均回收率为98.43%,RSD=1.81%。
二、薄层扫描法
采用薄层扫描法测定梓醇含量时,常用的展开剂为氯仿-甲醇-水系统,检测波长为413nm。如:刘长河等测定不同产地地黄中梓醇含量。采用薄层扫描法,展开剂为氯仿-甲醇-水(7:4:0.5),显色剂为10%硫酸乙醇溶液,扫描波长为413nm。回归方程为y=621.76X+118.69,r=0.9966,平均回收率为99.10%,RSD=2.50% 。样品先用水提取,再用水饱和的正丁醇提取。
三、毛细管电泳法
赵新峰等测定生地、熟地及不同炮制时间地黄中梓醇的含量。采用毛细管区带电泳内标法定量。用未涂层石英玻璃毛细管(60cm×75μm,有效长度45cm),检测波长210nm,重力进样(10cm ×5s),运行电压14 kV,温度20℃,背景电解质为50 mmol-L 硼砂溶液。进样前以0.5 mol/L氢氧化钠溶液和背景电解质各冲洗3min。平均回收率生地为98.2%,熟地为99.5%;RSD分别为2.1%和2.4% (n=5)。样品采用乙醇回流提取。