血竭为棕榈科植物麒麟竭Daernonorops draco Bl.果实渗出的树脂经加工制成。2005版《中国药典》采用高效液相色谱法,以血竭素为指标成分测定其含量。常用的含量测定方法为高效液相色谱法和薄层扫描法。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》血竭含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(50:50)为流动相,检测波长为440nm;柱温为40℃。理论板数按血竭素峰计算应不低于4000。
供试品溶液的制备:取本品适量,研细,精密称取0.05~0.15g,置具塞试管中,精密加入3%磷酸甲醇溶液10ml,密塞,振摇3分钟,滤过,精密量取续滤液1ml,置5ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
文献报道的方法,常用的为药典所载的方法。现举例常用的实验条件:
①日本岛津公司LC-10A 型高效液相色谱仪,大连中北色谱工作站;Diamonsil(钻石)HPLC色谱柱(4.6×50mm);流速lml/min;灵敏度0.010AUFS;检测波长440nm;流动相:乙腈-3%磷酸溶液(50:50);柱温40℃。样品溶液的制备:取本品(麝香接骨胶囊)3O粒,取出内容物,混匀,精密称取3.Og置25ml棕色容量瓶中,精密加入3%磷酸甲醇溶液lOml,密塞,超声5min,滤过,残渣及滤纸用少量甲醇洗涤,合并滤液,精密量取滤液lml,置5ml棕色容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
②日本岛津LC-4A高效液相色谱仪;SPD-2AS紫外检测器;RC-R3A数据处理机(日本岛津);ZORBAX-DS(0.25 m×4.6φ,5μm)色谱柱;乙腈-甲醇-0.05mol/LnaH2PO4(3O:25:45)为流动相;流速1.0ml/min;检测波长为268nm;柱温45℃。样品溶液的制备:取样品(唯茵骨乐胶囊)内容物约4g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入3%磷酸甲醇溶液20ml,超声提取30min,冷却至室温,滤过,加3%磷酸甲醇溶液溶解,转移至25ml量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,0.45μm的微孔滤膜过滤,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。
二、薄层扫描法
常用的实验条件为:
①硅胶G;展开剂:氯仿-乙酸乙酯-甲醇(9:0.5:0.5);测定波长475nm,参比波长650nm。供试品溶液的制备:取本品(七厘散)约0.15g,精密称定,置锥形瓶中,加人混合液2Om1,高氯酸3ml,温水浴中搅拌30min.冰水浴中冷卸1Omin,滤过,药渣加混合液lOml,再于温水浴中搅拌l5min,冰水中冷却lOmin。滤过,如此操作三次,合并滤液,回收溶剂并蒸干,残渣以混合液充分溶解,并滤过人50ml量瓶中,用混合液少量多次洗涤残渣及滤器,洗液并人滤液中,以混合液稀释至刻度,作为供试品溶液。
②硅胶G;展开剂:氯仿-甲醇(19:1);测定波长480nm,参比波长560nm。供试品溶液的制备:取本品(跌打七厘片)研细,精密称取10g,用甲醇-氯仿(3:1)混合溶液55m1,分二次超声处理,每次15min,合并滤液,移入50ml棕色量瓶中,加入70%高氯酸0.5ml,加甲醇-氯仿(3:1)混合溶液至刻度,摇匀,包上黑纸,10℃以下冷藏保存,作为供试品溶液。