夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。2005版《中国药典》一部收载的含量测定方法为采用高效液相色谱法,以熊果酸为指标成分。文献报道的夏枯草及其制剂的含量测定方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法等。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》夏枯草含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(88:12)为流动相,检测波长为210nm;理论板数按熊果酸峰计算应不低于4000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过二号筛)约2克,精密称定,置索氏提取器中,加乙醚适量,浸泡过夜,加热回流6小时,回收溶剂,残渣用石油醚(60~90℃)浸泡两次,每次15ml,每次2分钟,倾出石油醚液,残渣挥干残留溶剂,用无水乙醇溶解并转移至10ml量瓶中,加无水乙醇至刻度,精密量取1ml,置10ml量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。
文献的报道情况总结如下:
实验仪器:①高效液相色谱仪包括Waters 590 泵、Hi-tachi 紫外检测器、Waters 740 数据处理机;②日本岛津公司高效液相色谱仪,包括LC-10AT溶剂输液泵、SPD-10AV紫外-可见检测器、CTO-10AS柱温箱、7725i型手动进样器、N-2000 色谱数据工作站;③
色谱条件:①色谱柱为μBondapak C18,流动相为甲醇-水-磷酸(88:12:0.1) , 紫外检测波长为210 nm,柱温为室温;②色谱柱:Shim-pack ODS 柱(4.6mm×150mm);柱温:25℃;流动相:甲醇-水-冰醋酸(90:10:0.04);流速:1.0mL/min;检测波长:220nm;③色谱柱为AtlantisC18分析柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相为0.02mol/L磷酸二氢钠-甲醇(体积比为15:85);检测波长为215nm;柱温为室温;④色谱柱Diamon sil C18柱(4.6×250mm, 5μm);流动相:甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(95:5:0.3:0.02);检测波长为215nm;柱温30℃;
供试品溶液的制备方法:一般以甲醇、无水乙醇为提取溶剂,采用超声、回流等方法提取,可以用石油醚、乙醚等脱脂或萃取。
也有用蒸发光散射检测器的,如:赵宇新等采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定了夏枯草、木瓜等中药及制剂中的齐墩果酸和熊果酸的含量。采用Kromasil C18色谱柱,柱温为40℃,流动相为甲醇-水-冰醋酸(260:40:0.15)。蒸发光散射检测器:漂移管温度85℃,气体流速为2.60L/min。
马稳等建立了柱前衍生高效液相色谱紫外可见检测夏桑菊中熊果酸的分析方法。在CS2 介质中用对甲苯胺衍生熊果酸,于C18柱上,以pH=6.2的甲醇-水(80:20) 为流动相,290nm 检测衍生物,熊果酸在0.3~30.0mg/ L 范围内与色谱峰高呈良好线性关系,r =0.9986,检出限为2.46μg/ L。
二、薄层扫描法
李晓蒙等采用双波长薄层扫描法测定夏枯草中熊果酸的含量。采用CS- 9000双波长薄层扫描仪(日本岛津产品)。薄层色谱条件:硅胶G薄层板,展开剂:苯-乙醚-醋酸乙酯(7:2:1);显色剂:10%硫酸乙醇溶液。薄层扫描条件:扫描检测波长为520nm,参比波长为700nm,SX= 3,反射法线性扫描,狭缝1.2mm×0.4mm,步距0.2mm。制备供试品溶液时先用乙醚索氏提取,提取液回收乙醚至干后残渣再用石油醚(30~60℃)浸泡,倾去石油醚,残渣加适量无水乙醇-氯仿=1:1 混合液溶解。
于华忠等采用薄层扫描法对车前草、夏枯草、山茱萸中熊果酸的含量进行了测定,其TLC测定条件为:展开剂:环己烷-氯仿-乙酸乙酯(20:5:8),显色剂及扫描条件同上。药材用60%的乙醇超声提取。
李培毅等测定夏枯草中熊果酸的含量时,采用双波长薄层扫描法。以环己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20:5:8:0.5)为展开剂;λS=530nm,λR=700nm作为熊果酸含量测定的扫描波长。夏枯草药材用无水乙醇回流提取,石油醚萃取。
吴垠等测定夏枯草浸膏的含量时,采用硅胶G板;展开剂为苯-乙醚(1:1),显色剂为10%硫酸乙醇溶液;λs=500nm,λR=700nm。夏枯草浸膏用乙醚、石油醚提取后,残渣用适量无水乙醇-氯仿(3:2)混合液溶解。
也有用毛细管电泳和气相色谱法测定夏枯草的含量的。如:刘海兴等采用毛细管胶束电动色谱法测定了夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量;闫花丽等采用衍生化气相色谱法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量。