头孢他啶为(6R,7R)-7-[[(2-氨基-4-噻唑基)-[(1-羧基-1-甲基乙氧基)亚氨基]乙酰基]氨基]-2-羧基-8-氧代-5硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-3-甲基吡啶内盐五水合物。2005版《中国药典》收载的含量测定方法为高效液相色谱法,注射用头孢他啶的含量测定方法按照头孢他啶含量测定项下的方法测定。文献报道的头孢他啶及注射用头孢他啶的含量测定方法主要为高效液相色谱法,还有毛细管电泳法等。现将其含量测定方法作一介绍。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》头孢他啶含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-pH7.0磷酸盐缓冲液(称取无水磷酸氢二钠42.59g,磷酸二氢钾27.22g,加水溶解并稀释至1000ml)-水(40:200:1760)为流动相;检测波长为254nm;流速为每分钟1.5ml;柱温45℃。头孢他啶峰与相邻各杂质峰的分离度应符合要求。
文献报道的HPLC法大都为药典法,也有不同于药典的,分别举例说明。
李江采用高效液相色谱法测定头孢他啶及舒巴坦钠的含量。仪器:惠普高效液相色谱仪(HP1100);色谱柱:迪马C18柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相:乙腈-0.005mol/L的四丁基氢氧化铵溶液(PH5.0±0.1)(20:8O);流速:1.OmL/min;检测波长:23Onm;柱温:室温;进样量:20μL。头孢他定在30~300μg的范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。
彭军等用高效液相色谱法测定头孢他啶注射剂的含量。美国BECKMAN通用II型高效液相色谱仪(110B泵,406接口,UV-166检测器,AST-486微机,黄金系统软件6.O版)。 美国BECKMAN 公司ODS-C18柱(4.6mm×l50mm,5μm);流动相:磷酸盐缓冲液(含O.08%磷酸氢二钠,pH=4.7)-甲醇=9:1(V/V);流速:1.5ml/min ;紫外检测波长:254nm;灵敏度:0 01AUFS;进样量:20μl。
韩冬梅等分析测定头孢他啶/舒巴坦钠混合制剂中各组份的含量。高效液相色谱系统由日本岛津公司LC-10AVP高压泵,SPD-10AVP检测器,C-R7A 积分仪,7725I进样阀,色谱柱inertsil ODS-3(5μm)150×4.6mm组成。以乙腈-pH7.0磷酸盐缓冲液(称取无水磷酸氢二钠42.59g,磷酸二氢钾27.22g,加水溶解并稀释至1000ml)-水(40:200:1760)为流动相;流速为每分钟1.0ml。检测波长运行程序:0.01min:230nm;6.0min:254nm;12min:230nm。头孢他啶在25.8μg/ml~412.7μg/ml浓度内有良好的线性关系。舒巴坦钠在28.2μg/ml~451.2μg/ml浓度内有良好的线性关系。
二、毛细管电泳法
郭丹等用HPCE测定注射用头孢他啶的含量。高效毛细管电泳仪,石英毛细管柱(60cm×75μm)(均为美国Waters公司产品);Milennimn32数据处理系统。有效毛细管长度60cm×内径75μm;硼砂缓冲液25mmol/L (pH8.2),高压进样5s,分离电压20KV,温度为25℃,检测波长为254nm,头孢曲松为内标。头孢他啶在4~20μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为98.96%(n=5)。实验还对HPLC和HPCE的测定结果进行了比较,两种方法测定的结果无显著性差异。HPLC法与HPCE法相比,具有消耗成本高、分析时间长、有机溶剂用量大等缺点。利用高效毛细管电泳法测定头孢他啶的含量,方法简便、准确、快速、重复性好,可为头孢他啶的质量控制提供一种简便的方法。