来源:作者:卢丽萍，王俊华 摘要 目的: 建立珍视明滴眼液中天然冰片的含量的测定方法。方法: 以萘为内标, 采用内标法测定; 选择0V -17填充柱、FID检测器、程序升温气相色谱法测定珍视明滴眼液中天然冰片的含量。结果: 冰片在0.109～1.090μg 范围内线性关系良好(r=0.9996),方法回收率为99.6% (RSD=1.91% ) ; 本品中冰片含量为0.047～0.049%。结论: 方法简便, 快速, 准确, 可用于该药品中天然冰片的定量测定。
关键词：天然冰片;龙脑;珍视明滴眼液;GC法;含量测定
珍视明滴眼液是由珍珠层粉、天然冰片、硼砂、硼酸等制成。具有明目去翳、清热解痉之功, 用于青少年假性近视, 缓解眼疲劳。其中冰片具有开窍醒神, 清热止痛, 去翳明目的作用, 常用于闭症神昏, 目赤肿痛, 喉痹口疮等症治疗。由于冰片具有易挥发的物理特性, 我们采用气相色谱法对珍视明滴眼液中冰片含量进行定量和测定方法的研究, 为该药品和含冰片滴眼液质量标准和控制方法提供实验依据。结果表明本方法操作简便, 快速, 重现性好, 结果准确。
1 仪器与试药
1.1 仪器: GC214B气相色谱仪(日本岛津) ;CR27A数据处理器(日本岛津) ; Sartorius BP211D电子天平。
1.2 试药: 冰片对照品(中国药品生物制品检定所, 批号74328902) ; 内标物: 萘(分析纯) ; 试剂:乙酸乙酯(分析纯) ; 珍视明滴眼液: 江西施康中药股份有限公司珍视明药业分公司生产(市售)
21 方法与结果
2.1 色谱条件: OV-17 (10%) 不锈钢柱(2m×3mmi.d.) ; 柱温: (105℃(9min) 10℃/min160℃初始温度105℃维持9分钟,以每分钟升温10℃的速率升至160℃) 维持5min) ; FID检测器: 温度250℃; 汽化室温度:200℃; 载气(N2)流速:30ml/min; 氢气流速:50ml/min; 空气流速:500ml/min;供试液进样量0.6μl。
2.2 标准溶液制备
2.2.1 内标溶液 取萘356.1mg 于50ml 容量瓶中, 用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度, 摇匀。
2.2.2 对照品储备液 取冰片对照品54.41mg 于25ml 量瓶中, 用乙酸乙酯溶解稀释至刻度, 摇匀。
2.2.3 对照品溶液 精密量取5ml 蒸馏水,1ml对照品储备液, 分别精密加入1ml内标溶液、2ml乙酸乙酯于15m l带塞试管中, 涡漩混合5min后放置, 待分层后取上层乙酸乙酯液作为对照品溶液。
2.2.4 供试液 取珍视明滴眼液5支倒出内容物, 混匀, 精密量取5ml于15ml带塞试管中, 分别精密加入1ml 内标溶液, 3ml乙酸乙酯, 涡漩混合5min后放置,待分层后取上层乙酸乙酯液作为供试液。
2.3 系统适应性 在上述色谱条件下取对照品溶液1.0μl进样测定,理论板数按萘计算应大于1500,异龙脑峰与龙脑峰的分离度应大于1.5。
2.4 线性关系试验 精密量取对照品储备溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置于6个10ml量瓶中,分别精密加入1ml内标溶液,用乙酸乙酯稀释至刻度摇匀。分别进样1.0μl, 测定各组分的保留时间和峰面积。以冰片质量为Y,冰片峰面积( 异龙脑与龙脑峰总面积) 与内标峰面积的比值为X,进行线性回归分析,得回归方程为Y=0.1903+4.6782X(r=0.9996),结果表明冰片进样量在0.109～1.09μg 范围内有良好线性关系。
2.5 精密度试验 取对照品溶液进样, 按本法连续进样测定6次, RSD=0.66% (n=6)。
2.6 重复性试验 对样品(031015) 的供试液按本法平行测定5次, RSD=0.97% (n=5)。
2.7 稳定性试验 对样品(030936) 的供试液按本法每隔1h 测定1次, 检测至7h,RSD=1.20%,表明供试液至少在7h内稳定。
2.8 加样回收试验 精密量取5份已知含量的珍视明滴眼液(031015)各5ml, 分别精密加入适量冰片对照品, 1ml内标溶液, 3ml乙酸乙酯, 涡漩混合5m in 后放置, 待分层后取上层乙酸乙酯液, 按本法测定, 用内标法计算冰片含量并计算加样回收率。
2.9 样品测定: 取珍视明滴眼液5支, 按21214 项方法制备供试液后, 按本法测定, 用内标法计算。
31 讨论
3.1 色谱条件的选择 ①柱温的选择:根据恒温测定的色谱流出曲线,显示供试液中的防腐剂苯氧乙醇保留时间长, 而且是较严重的拖尾峰,为取得较高的柱效和保证龙脑和萘两者有较好的分离,采用适宜的低温分离; 然后升温加速清洗除杂质苯氧乙醇等,缩短实验分析周期,因而采用程序升温法。②固定液的选择:比较OV -17和PEG220M固定液对样品组分的保留作用, 发现PEG220M的保留作用强, 保留时间太长,杂质苯氧乙醇难以洗出易污染色谱柱,因而选择弱极性的OV-17,适当调节柱温,可保证样品中各组分达到较好的分离。③内标的选择:参考以往的文献,内标物一般选择正烷烃,由于价格昂贵和缺乏,给实验开展带来困扰。萘价平易买,在一般色谱条件下能与冰片完全分离,此外萘具有冰片一样的升华特性, 可减少样品供试液制备和测定过程中回收率的不稳定性, 这现象在微量分析中特别明显。建议在样品组分与萘出峰不重叠的前提下可选择萘作内标测定冰片。④高效毛细管色谱柱由于其高效性, 分离效果比填充柱好, 但价格高,有条件的用户建议使用高效毛细管色谱柱测定。
3.2 由文献可知, 天然冰片有龙脑冰片、艾片两种,龙脑冰片主含右旋龙脑(d-龙脑),艾片主含左旋龙脑(L-龙脑);但两者均不含异龙脑。冰片对照品是人工合成,由龙脑(d1)、异龙脑组成。在本法实验条件下,冰片对照品GC图有异龙脑和龙脑两个峰;本品有一个峰,比较保留时间,可确定为龙脑峰,因此珍视明滴眼液中冰片是天然冰片。
3.3 中国药典中本品检测项有: 总氮量测定和TLC法鉴别冰片。没有建立天然冰片的含量测定方法, 我们参考有关文献, 建立了珍视明滴眼液中天然冰片的气相色谱测定法。本法不但可用于“珍视明滴眼液”中天然冰片的定量测定, 还可定性鉴别冰片原料的来源, 防止用价廉的合成冰片充当价格高的天然冰片使用。
实验结果表明,用萘作内标,选择弱极性的固定液OV-17填充柱,FID检测器,采用程序升温方法测定“珍视明滴眼液”中的冰片含量是可行的, 该方法操作简便, 快速, 结果准确, 可作为该药品中天然冰片含量测定和定性鉴别, 并用于生产和药品质量标准控制。
