附红细胞体病(Eperythrozoonosis)是由附红细胞体(Eperythrozoon)寄生于人畜红细胞表面,血浆及骨髓所引起的一种人畜共患的传染病。临床上多呈隐性经过,急性发病时主要以发热、贫血和黄疸为主要特征。本病最早发现于1928年,直到1950年确定猪的黄疸性贫血是由附红细胞体引起的,才逐渐被重视起来。本病广泛分布于世界各国,我国于1981年首先在家兔体内发现后,相继在牛、羊、猪、犬等动物中查到附红细胞,以后在人群中证实了亦有感染。从1982年,许耀成等首次在江苏南部红皮病血液中查到附红细胞体,到1994年就已在13个省市发现此病。近年来,猪附红细胞体病的发生和流行呈明显上升趋势,据有关报道,感染率均在90%左右,其发病率在15%~22%不等,有的地方发病率已达到50%~60%,甚至高达90%。
猪附红细胞体病不仅导致畜产品质量和产量的降低,还导致怀孕母猪出现受胎率下降或发生流产、死胎等现象,降低免疫机能。
目前,对本病的传播途径还不完全清楚,病原体的体外培养还在试验性阶段,疫苗研制还没有成功,对本病的治疗还主要靠药物,这就导致临床上滥用药物,造成畜禽体内的药物残留,所以怎样选择和合理用药,就成为研究本病的一个关键。另外,多数人认为夏季为附红细胞体病的高发期,而且主要由蚊子等吸血昆虫传播,而关于冬季附红细胞病的相关报道较少,忽视了其在非流行季节的流行特点。
一、病原学特点
1. 病原分类
现在附红细胞体的分类地位还没有完全确定,对于附红细胞体的分类仍存在分歧,有报道将其归属为支原体,也有报道将其归为血液原虫。目前国际上广泛采用1984年版《伯杰细菌鉴定手册》进行分类,将附红细胞体列为立克次氏体目(Rickettsiaies)无形体科(Anoplasmataceae),血虫体属也称附红细胞体属(Eperythrozoon)。
2. 病原形态
附红细胞体呈球形、卵圆形、月牙形、短棒形等多种形态的折光性很强的绿色小体,会运动,附着在红细胞表面使红细胞形状不规则,呈锯齿状、星芒状、菠萝状等多种形状,而正常红细胞边缘规则、呈圆形,随液体流动,无震颤和扭动;有些小体游离于血浆中,并作上下震颤、左右扭动,有些带动红细胞振动,甚至滚动;电镜下红细胞膜缺损凹陷,表面有大小不一的链球状、杆状附红细胞体附着,被感染红细胞呈波浪形改变,附红细胞体呈球形结构物,边缘密度较中间密度大,附着点有纤丝状物与红细胞相连。
3.病原检测方法
目前常规检测方法有鲜血压片法、血液涂片法、血清学检测法等。本次实验主要采用鲜血压片法、瑞氏染色法、马基阿韦勒(Macchiavllo)染色法。
鲜血压片法 病猪耳静脉采血,滴一滴于载玻片上,与等量生理盐水混合,加盖盖玻片,置于油镜下镜检,可进行形态学分析和判断。可见大量附红细胞体附着于红细胞上,形成圆形、椭圆形突起,使红细胞呈锯齿状、星芒状、菠萝状等多种形状;另一部分存在于血浆中作翻滚变形运动,折光性很强,可作为判断依据。由于鲜血压片法受采血技术、卫生环境、血液理化变化等多种因素影响,故对其准确性争议较大,因此,鲜血压片法不宜作为准确判断附红细胞体病的标准。
瑞氏染色法 病猪耳静脉采血,按常规制作血液涂片,自然干燥;加瑞氏染液至完全覆盖血膜为止,3~5分钟;加等量缓冲液4~10分钟;水洗,干燥,镜检。
结果分析:红细胞呈紫红色,附红细胞体呈蓝色,被感染的红细胞呈锯齿状、星芒状、菠萝状等,附红细胞体大小形状不一,数量不等,在油镜下观察较为清楚,且此方法简单易于操作,可作为附红细胞体病的诊断依据。
马基阿韦勒(Macchiavllo)染色法 病猪耳静脉采血,按常规制作血液涂片,自然干燥;甲醇固定30S;蒸馏水一过水洗;用0.25%碱性品红染色30分钟;用0.5%柠檬酸溶液迅速分色3S;蒸馏水一过水洗;用1%美兰对比染色20~30S;水洗,脱水,透明,封固,镜检。
结果:附红细胞体呈红-紫红色,红细胞呈蓝色。
4. 血清学诊断
国内外利用间接血凝试验,补体结合试验和酶联免疫试验、免疫荧光试验,对流电泳检测附红细胞体抗获得成功,但被证明只适用于群体诊断;另外,随着分子生物学研究不断发展,分子生物学诊断技术也被用于附红细胞体病的诊断,感染动物血液中含有大量附红细胞体,从感染血液中抽取DNA,并以mp标记制成探针,证明能区别附红细胞体感染和非感染动物,并且不与动物感染其他疾病的血清中DNA发生杂交反应。近年来又利用PCR技术来诊断附红细胞体病获得成功,感染24小时就可检测到,PCR-DNA杂交技术在附红细胞体个体实验室检测时,表明本方法很简单准确,敏感特异,但在实际检测应用时还有待改进。而韩惠英等用物理方法钝化猪附红细胞体抗原,用钝化抗原免疫兔制备免疫血清,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗,建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA)检测方法,结果显示,用PPA-ELISA方法检测猪血液中的附红细胞体具有很高的敏感性和特异性、重复性良好,完全适用于猪附红细胞体病的实验室诊断,也是现在比较准确的检测方法。
二、流行特点
据以往许多相关报道,普遍认为附红细胞体多流行于夏秋季节,以蚊、虱、蜱等吸血昆虫和被污染的针头、打耳钳、打牙钳等手术、生产器械传播,另有学者报道附红细胞体病可以通过胎盘进行垂直传播,而关于冬季附红细胞体病的报道较少,笔者经调查发现,现在附红细胞体的阳性率很高,但在冬春季节发病率并不高,规模较大、环境条件较好的猪场一般为零星散发;而环境条件较差,虱子较严重的小规模猪场及散养户较易发生群发。笔者曾将发病猪和健康猪放入环境卫生较好的猪舍中,长期同圈饲养,而未见健康猪只发病,说明本病不会发生接触性感染。经过长期的调查笔者认为冬季被感染猪群在环境条件良好,机体免疫机能正常情况下,机体与病原之间保持着动态平衡,所以机体没有临床表现;当环境条件改变或机体免疫机能低下时,引起病原体增殖,表现临床症状。另外,冬季的主要传播方式为手术、生产器械传播、母体垂直传播和虱子等非季节性吸血昆虫传播。另外,发病经产母猪往往有既往病史,一般都有秋季发病的记录,这说明附红细胞体病有一定的复发率。
三、临床表现
该病临床上均以发热和贫血为主要特征。在冬季附红细胞体病多为散发,病猪一般症状较轻,病初多表现为精神萎顿,食欲减退或不食,常卧地不起,不愿活动,体温升高到39.5℃以上,但一般不超过40.5℃,呼吸、心跳加快;皮肤、结膜苍白,缺乏弹性,毛根处有出血点,脊背两侧较严重;病猪多便秘,当病程较长或并发圆环病毒、猪瘟等疾病时多表现为拉稀;病情严重时食欲废绝,体温偏低,皮肤苍白,结膜黄染,血液稀薄,血凝缓慢,个别病例有神经症状;有的病猪耳部皮肤变干坏死,有的病猪发生丘疹性皮炎。母猪还会有乳房或外阴部水肿,产奶量减少,母性缺乏或不正常,屡配不孕,发情延长,不发育,返情,受胎率低,流产、死胎、产弱仔等。
四、病理变化
1.全身皮肤苍白,毛根处有出血点,皮下脂肪黄染,全身肌肉苍白,全身黏膜苍白或黄染,血液稀薄,血凝缓慢;肝脏肿大、质脆,颜色变浅,严重者呈土黄色,表面有出血点或小坏死灶,胆汁浓稠,呈墨绿色;脾脏肿大;肺水肿,有坏死灶;淋巴结肿大,切面多汁,呈黄色;肾肿大,苍白,有出血点,心肌苍白,冠状脂肪黄染,有出血点,心内外膜有出血点,心包积液;小肠壁薄、透明,积液或积气;脑膜充血。
2.组织学变化,采取病猪肝、脾、肺、肾、淋巴结等组织,常规处理后,切片,染色,封固,镜检。
肝脏 肝脏出血,肝细胞肿胀,有颗粒变性,部分肝细胞坏死,有淋巴和单核细胞浸润,小叶间胆管扩张,中央静脉扩张、水肿。
脾脏 脾水肿,中央动脉扩张、充血、出血。
肺脏 肺间质水肿、充血,肺病泡壁增厚,肺泡毛细血管扩张、充血、出血,肺泡内有少量血细胞。
肾脏 肾间质充血、出血,肾小管上皮细胞肿大,管腔变窄,肾小球肿大。
淋巴结 淋巴结充满淋巴细胞,生发中心扩张,皮质淋巴窦扩张。
血液生理指数 笔者对5份发病猪全血进行检测,感染附红细胞体的病猪红细胞总数和血红蛋白含量均有不同程度的降低,而白细胞总数则高于正常值,个别血样血小板数目也有减少。
五、防治方法
据相关报道,血虫净(贝尼尔)、914(新砷凡钠明)、四环素类、红霉素,磺胺间甲氧嘧啶、大蒜素、青蒿素等对附红细胞体均有效,杨秀珍等报道用敌百虫静脉注射治疗奶牛附红细胞体病,治愈率达100%。笔者选择多种药物进行组方,选择性进行治疗。所选药物有:康嘉(磺胺间甲氧嘧啶,北京伟嘉生产,10毫升/支,),长效土霉素(湖南农大生产,5毫升/支,),强效弓链康(磺胺间甲氧嘧啶,湖南农大生产,10毫升/支),血虫嘉(土霉素和盐酸伯胺喹,北京伟嘉生产,10毫升/支,),长效治菌磺(磺胺间甲氧嘧啶,山东明发生产, 5毫升/支,),强力抗(强力霉素,郑州碧云天生产,10毫升/支,),特效血虫净(盐酸伯胺喹磷注射液,郑州碧云天生产,10毫升/支,),强力血虫净(贝尼尔,河北远征生产,1克/支,),附虫净 (三氮脒,哈尔滨动物制药有限公司生产, 10毫升/支,) 等药物,分别根据药物主要成分进行组方,发现磺胺间甲氧嘧啶和四环素类配合,磺胺间甲氧嘧啶和贝尼尔配合,四环素类和贝尼尔交替使用,均取得了较好的效果,治愈率均能达到90%以上;因为附红细胞体可以影响机体免疫力,所以配合黄芪多糖注射液,以提高免疫力,疗效更佳。对危重病例要进行对症治疗,注意铁剂、能量合剂和辅助药物的添加,以提高药效,降低养殖成本。
对于该病的预防方法要逐渐淘汰阳性母猪,建立阴性健康种猪群;定期对猪群进行检测,及时隔离阳性猪,并进行针对性治疗;适时的在饲料中添加土霉素、强力霉素、阿散酸等进行药物预防;对针头、手术器械、打牙钳、打耳钳等进行有效消毒,以减少病原传播;适时驱虫,特别是虱、脾等吸血昆虫;注意环境卫生,并尽量减少猪群应激;不从疫区购猪,以避免病原的引入。
六、小结
1. 目前猪场中猪附红细胞体病阳性率较高,特别是目前鲜血压片法的不准确性造成了假阳性率升高,从而造成误诊,延误病情,造成了许多不必要的损失。目前鲜血压片镜检产生假性的原因,笔者认为可能是由于多方面原因引起的血液中的水份散失,血浆渗透压升高,引起血细胞皱缩引起的。
2.在附红细胞体的传播途径方面尚有争议,究竟其能不能进行接触感染还需要进一步研究。
3.在冬季附红细胞体病多为散发,且缺乏典型病例,很少出现死亡,再加上多与圆环病毒病和猪瘟等免疫抑制性疾病并发,所以在诊断时要慎重,选择药物是要考虑周全。
4. 不可滥用药物,更不能随意加大药物剂量,注意药物的合理搭配和疗程,必要时对病畜进行停药,并进行解毒、调理。
5.现在附红细胞体的增殖方式尚有争论,主要认为有二分裂方式、裂殖体分裂方式、出芽生殖方式三种。
6. 由于马基韦勒染色法技术尚未成熟,故多次试验,效果并非很明显,染色方法应进一步改进。