3 试验过程
3.1 样品采集与处理
在挤奶时间采集挤后奶样用于培养。采集用于培养的乳样之前，清洁和干燥乳头很重要。所有乳样必须以正确的方式采集，污染乳样没有任何检验价值。乳样必须采自用单个纸巾擦干、采样前用700 mL/L酒精棉球用力擦拭过的干净、干燥的乳头，之后采集乳样。乳区乳样每个乳头采集2.5 mL，用乳头消毒液浸泡乳头。样品采集后，将取样试管放在试管架上，以便运往实验室。乳样应当放置在用冰块降温至5 ℃的便携式冷藏箱中送往实验室。
3.2 样品的微生物学鉴定
引起奶牛乳房炎的致病菌包括金黄色葡萄球菌(SA)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)、无乳链球菌(SAG)、犬链球菌(SC)、其他链球菌(OS)、大肠埃希菌(EC)、牛棒状杆菌(CB)、其他(OTH)。
图1标明了鉴定这些致病菌的实验操作过程，非常方便亚临床乳房炎致病菌的鉴定，使用材料少，成本低、时间短。亚临床乳房炎致病菌鉴定的基本要点是菌落的特征。葡萄球菌为小至中等大小清晰白色或黄色菌落，链球菌为小型无色、湿润、隆起、半透明菌落。
如果凭菌落特征不能区分葡萄球菌(Staphylococci)和链球菌(Streptococci)，那么接触酶试验结果非常方便区分。如果凭菌落特征也不能区分大肠埃希菌(EC)和葡萄球菌(Staphylococci)，则可用KOH试验结果非常方便区分。葡萄球菌的接触酶试验为阳性，而链球菌的接触酶试验为阴性；大肠埃希菌的氢氧化钾试验为阳性；凝固酶阴性葡萄球菌的氢氧化钾试验为阴性。
金黄色葡萄球菌(SA)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)、无乳链球菌(SAG)、犬链球菌(SC)、其他链球菌(OS)、大肠埃希菌(EC)、牛棒状杆菌(CB)、其他(OTH)。
4 小结
许多乳房炎致病菌有时能够从奶牛生活的环境中分离到，因而如果发现5个以上同样大小和颜色的菌落，就可做出明确诊。对于葡萄球菌，如果仅发现1个菌落，对诊断也有重要意义。混合感染并不常见，如果乳区乳样中经常发现2种或更多种细菌，那么有可能取样方法不正确[12]。
培养20 h后，观察培养结果。此时能够观察到的几乎都是革兰氏阳性球菌，所以，必须按照菌落的大小、颜色来区分葡萄球菌、链球菌，很少能检测到大肠埃希菌，因为如果大肠埃希菌侵入乳腺，就会迅速繁殖并出现临床症状。培养20 h尚不能检测到牛棒状杆菌，要检测牛棒状杆菌，培养时间应在36 h以上。
健康、正常乳腺的未污染乳样不含有细菌。当乳区乳样出现3种或更多种不一致的菌落，那么这个乳样最有可能已被污染，该乳样也应该按污染乳样记录。