克伦特罗是β-肾上腺素激动剂（简称β-兴奋剂）的一种，从化学性质上看是苯乙醇胺的衍生物，其分子结构与肾上腺髓质等处分泌的肾上腺方去甲肾上腺素、多巴胺等儿茶酚胺类相似。在生理上，它能抑制糖原合成酸并激活磷四化酶，从而加速糖原分解，提高血糖和精代谢率；通过作用于脂肪组织，可提高激素敏感胀酶活性，加速脂肪分解，提高血液中游离脂肪酸浓度，促进其在肌肉组织中的氧化分解，增加心率、心血输出量、心缩压，提高骨骼肌、冠状动脉和肝脏等局部血流量。在动物营养上，利用它具有促进畜禽脂肪分解、增加肌肉生长作用，作为营养重新分配剂应用于饲料生产中。入食用了饲喂克伦特罗这种添加剂的动物所生产的畜产品后，由于畜产品中残留的克伦特罗会引起中毒，通常会出现肌肉震颤、心悸、精神紧张、头疼、肌肉疼痛、晕眩、反冒、呕吐、发烧、发抖等症状。因此，世界许
多国家禁止在饲料中使用克伦特罗来增加动物的瘦肉率。我国政府已明文规定在畜牧生产中严禁使用克伦特罗等β一兴奋剂。
目前，测定动物组织中的克伦特罗的方法有高效液相色谱一质谱联用法（HPLC－MS）、气相色谱-质谱联用法（GC－MS）、高效液相色谱法（HPLC）和酶联免疫吸附法（ELISA）等。通常以前两种作为确认方法，后两种作为筛选方法。中华人民共和国颁布的强制性农业行业标准（NY／T 468－2001）“动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱一质谱法”方法则为仲裁方法。
1目的
对动物组织中盐酸克伦特罗残留量的化学成分进行检测和定量。
2适用范围
适用于实验室检测工作的实施，对动物组织中盐酸克伦特罗残留量进行检测，最低检出限为2 μg/kg标准工作液）。
3 原理
样本用乙酸铵抽提，抽提液经离心、蒸干、净化、经双三甲基硅基三氟乙酸胺（BSTFA）衍生后用气相色谱一质谱联用仪测定。
4试剂与材料
4．1乙酸铵（1．45 g/L pH 5．2）（分析纯）
4．2甲醇（分析纯）
4．3正已烷（分析纯）
4．4乙氰（分析纯）
4．5双三甲基硅基三氯乙酸胺（BSTFA）
4．6盐酸克伦特罗标准溶液
4．6．1储备液：精确称取适量的盐酸克伦特罗（含量不少于 98．5 ％），用甲醇配成浓度为 1mg／mL的标准储备液，储于冰箱中。有效期3个月。
4．6．2工作液：将储备液用甲醇稀释为2．5－15 μk/kg。
5仪器及设备
5．l离心管50 mL，具塞
5．2匀浆机
5．3旋涡混合器
5．4高速冷冻离心机 10 000 r／min
5．5烘箱室温一300℃
5．6 日本岛津GCMS－QP5000气相色谱-质港联用仪：装有弱级性或非级性毛细管住的气相色谱仪和具电子轰击源的质谱仪。
6抽样和制样
6．l从市场和养殖场抽取具有一定批量的有代表性的无皮上肉，剔除杂质、脂肪。
6．2精肉用高速捣碎机捣碎混合均匀，放置冰箱冷冻备用。
6．3称取样本 10 g于高速捣碎机中，加40mL的乙酸铵，高速捣碎混合均匀，将样品倒入50 mL离心管中，加 10 mL正己烷摇匀。
6．4将离心管放置高速冷冻离心机中，将温度调至4℃，于 8 000 r／min离心 10 min，去掉正己烷层，收集下层清液。
7蒸干和净化
7．l吸20mL样品清液于瓷蒸发皿中，在 80℃水浴上蒸干。
7．2用20mL甲醇溶解残渣，过滤于60mL分液漏斗中，加 10 mL正乙烷经 2次萃取，去掉正己烷层，收集待测液于比色管中，在80℃水浴上蒸干，蒸干后在80℃供箱中烘干lh。
8衔生化
8．1经烘干后的残渣加50μL乙氰、100μL BSTFA，加盖于旋涡混合器上震荡馄匀。
8．2在60℃的烘箱加热衍生20 min。取适量的盐酸克伦特罗标准工作液同时行生化。
9 GC-MS仪器参数
9．l色谱条件
色谱柱：DB－l（ Dimethylpolysiloxane）：－ 60－325℃（350℃），30 m ×0． 25mm（内径），0．25μm（膜厚）。
进样口温度：230 ℃；柱温程序：100 ℃（保持3 min），以 30 ℃／min升温至240℃（保持20 min）。
进样方式：不分流
进样体积：1μL
进样条件：往前压50 kPa，住流量30 mL／min
溶剂延迟：5min
9．2质谱条件
离子源条件：温度：230℃；EI离子源；电子能量70 eV，电离电压 1．6 kV。
选择离子监测：（M／Z）肪，262，87，57。
10定量方法
盐酸克伦特罗标准工作液外标定量。
11分析结果
11．1盐酸克伦特罗（未衍生）的结构图和质谱图
11．2盐酸克伦特罗经BSTFA衍生后，硅烷化硅基代替了羟基上的氢离子，其结构因及质谱图(略)
11．3经衍生的盐酸克伦特罗标准离子色谱图（略）
12样本深加标样盐田克伦特罗的回收率结果
12．l回收率结果表
样本名称
峰面积（M/Z86-100.0）
保留时间（min）
回收率（%）
标样(2.5μg/kg)
114 192
10.540
样本添加标样(2.5μg/kg)
120 362
10.549
105.40
标样(2.5μg/kg)
231 829
10.537
样本添加标样(2.5μg/kg)
230 803
10.542
99.56
12．2样本添加标样回收率试验图谱
13结果与讨论
样品抽提时尽量把脂肪剔除干净，样品液经蒸干并烘干后行生时不能有水，否则会破坏行生试剂BSTFA的作用，衍生时加入已氰，达到了改善色谱行为和提高检测灵敏度的目的。
检测方法快捷简便，试剂成本较低，省时省力，在1d内可以完成全部实验部分的检测，适合市场对猪肉进行快速检测盐国克伦特罗残日量和对这种违禁药品的监控，保障人们的身体健康。
分析方法经过标准添加回收试验，证明仅对的灵敏度和回收率均达到要求。
