菊花为菊科植物菊Vhrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其绿原酸的含量。绿原酸的含量测定方法报道得较多,现介绍菊花及其制剂中绿原酸的测定方法。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》菊花含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液[取磷酸二氢钠15.6g,加水至1000ml,制成0.mol/L的溶液,加入磷酸适量,使pH为2.7]-甲醇(70:30)为流动相;检测波长为328nm。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于2500。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过一号筛)约1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,加热回流2小时,冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密;精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加三氯甲烷5ml,浸渍3分钟,弃去三氯甲烷液,残渣挥去三氯甲烷,加水适量使溶解,并转移至5ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。
文献报道的HPLC法一般为药典条件,如:①LC-6AD 型高效液相色谱仪(日本岛津公司)色谱柱为D iamon silTMC18 (4.6mm×150mm, 5μm );0.1mol/L磷酸二氢钠-甲醇(7.3:2.7) 为流动相;检测波长为326nm;柱温32℃。样品用丙酮超声处理。(杨振萍等,“HPLC测定川菊中绿原酸的含量”,光谱实验室,2005,22(5))。②PEIntegral 4000高效液相色谱仪;Nova-Pak C18色谱柱(4μm,4.6mm×250mm);流动相的配制:取磷酸二氢钠适量制成0.1mol/L的溶液,按2ml/L的比例加入磷酸适量,调整pH为2.65,超滤后与甲醇按70:30的比例混合;检测波长为328nm;温为室温。(李宗等,“菊花中绿原酸的含量测定”,中国中药杂志,1999,24(6))等。
顾瑶华等分析不同药用菊花品种绿原酸的含量时,采用惠普HP-1100系列高效液相色谱仪;色谱柱Kromasil C18柱;流动相以甲醇-水-磷酸(30:70:0.4)等度洗脱;检测波长328nm;柱温为室温。
二、紫外分光光度法
陈勇敢等测定菊花速溶片中绿原酸的含量,采用UV 2265紫外分光光度计,在328nm处测定。结果表明用紫外分光光度法测定菊花速溶片中绿原酸的含量, 不需分离提取, 具有操作简便、分析快捷、结果重现性好、回收率高的特点, 特别适用于基层单位适用。