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冬虫夏草含量测定方法(腺苷)

放大字体  缩小字体 发布日期:2007-10-22  来源:中国兽药114网  作者:信风  浏览次数:887

2000、2005版《中国药典》以及近几年的文献报道均采用高效液相色谱法测定腺苷的含量,现就文献报道的HPLC方法做一总结:

2005版药典收载的腺苷含量测定方法见“冬虫夏草含量测定项下”:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲剂(PH6.5)[取0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml,混合(PH6.5)]-甲醇(17:3)为流动相;检测波长:260nm。理论板数按腺苷峰计算应不得低于2000。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入90%甲醇10ml,密塞,摇匀,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,90%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

近五年文献报道方法:
色谱柱一般为反相C18色谱柱,具体的有:反相Symmetry C18(5μm),4.6×150mm;Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×150mm,5µm)等。
流动相多用甲醇-缓冲盐系统,常用的除药典所载外,还有:甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(13:87); 0.05 mol/molL磷酸氢二钠-甲醇(85:15) ,用磷酸调节pH 5.5;磷酸盐缓冲液(pHI6.8取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml,即得)-四氢呋喃(99:1)。另外,流动相也有用6%、7%乙腈水溶液。
采用的高效液相色谱仪主要有:惠普110高效液相色谱仪、岛津LC-10AT高效液相色谱仪、岛津LC—5A高效液相色谱仪、HP 1100系列高效液相色谱仪等。
检测器多为紫外检测器:岛津UV 260紫外分光光度计、SPD-10A紫外检测器、Waters 486型紫外检测器、G 1314A紫外可见检测器。
其他:柱温一般为室温,流速多为1.0ml/min;测定波长多为260nm、200 nm、250 nm等。。
关于样品处理,根据药材和制剂的具体性质采用合适的提取分离方法,一般采用不同浓度的甲醇提取。
腺苷标准样品的配置:有文献报道可用无水乙醇配置,但试验得知腺苷在无水乙醇中溶解性较差,不能被完全溶解,一般用75%~50%的乙醇溶液配置腺苷较好。有报导称腺苷在水中溶解度最大,但以水为溶剂较难过滤,且图谱峰形较难看,采用15%甲醇作溶剂可以避免。

 
 
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