1 材料与方法
1.1 鸡白痢沙门氏菌标准血清、鸡白痢沙门氏菌标准抗原(作对照用) 由山东省兽医总站化验中心购进。
1.2 亚硒酸钠增菌培养基、三糖铁培养斜面、S.S.培养基自备。
1.3 黄芩提取物 由鲁南制药有限公司提供。
1.4 普乐健(5%氟苯尼考,广州惠华动物保健品有限公司生产)、庆大霉素(山西省大同市利群制药厂生产)、环丙沙星(河南大明实业有限公司生产)、痢特灵(济南金达药化有限公司生产)、土霉素(华曙制药集团生产)分别从原料生产厂家购进。
1.5 试验用鸡 由养鸡专业户张某提供17日龄肉仔鸡,经临床检查病鸡表现昏睡,怕冷,精神沉郁,食欲减少或不食,翅膀下垂,拉白色浆糊样粪便,肛门周围常粘连石灰样粪便等明显的鸡白痢症状。鸡白痢全血平板凝集反应(用标准血清检
测未知抗原)阳性的AA肉仔鸡220只。随机抽样取10只进行剖杀,分离鸡白痢沙门氏菌。210只病鸡随机分成7组,6组进行治疗试验,1组作对照,分别在相同的环境条件下饲养。
1.6 鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定剖杀病鸡,取肝脏,无菌操作接种于亚硒酸钠增菌培养基,37℃培养24 h;无菌操作挑取菌落接种于SS培养基,37℃培养24 h,肉眼可见大量无色半透明小菌落。挑取菌落抹片革兰氏染色,镜检可见两端椭圆、杆状或卵圆形,不形成芽胞和荚膜的革兰氏阴性小杆菌。同时,用铂金耳钩取菌落在三糖铁培养基斜面划线且底层穿刺,37℃培养24 h,可见培养基斜面底层变为黑色,斜面仍为红色。由此可以确定所分离细菌为鸡白痢沙门氏菌,SS培养基保存备用。
1.7 抑菌实验 按治疗量的4倍浓度制备纸片,黄芩提取物(6 000 μg/g)、普乐健(含氟苯尼考400 μg/g)、庆大霉素(160μg/g)、环丙沙星(200 μg/g)、痢特灵(1 600 μg/g)、土霉素(3 000 μg/g)对上述分离的沙门氏菌做抑菌实验,并测得抑菌圈直径,以毫米为单位。
1.8 治疗试验 每组鸡30只,分别是黄芩提取物治疗组、普乐健治疗组、环丙沙星治疗组、庆大霉素治疗组、痢特灵治疗组、土霉素治疗组、对照组。治疗试验鸡分别按每种药物的规定治疗量投喂10天(痢特灵组喂7天),观察每组鸡的临床表现,10天后分别做鸡白痢全血平板凝集反应。
1.9 疗效判定 投喂药物10天后,病鸡临床症状消失,鸡全血平板凝集反应为阴性者视为治愈;临床症状消失,全血平板凝集反应为阳性者视为有效;临床症状没消失,全血平板凝集反应为阳性者视为无效。
2 结果
2.1 抑菌实验结果 各药物抑菌圈直径见表1。
表1 抑菌实验结果(mm)
药物名称 黄芩提取物 普乐健 庆大霉素 环丙沙星 痢特灵 土霉素
抑菌圈直径 23 28 22 22 17 8
体外抑菌实验说明鸡白痢沙门氏菌对前四种药物敏感,后两种相对较差。
2.2 治疗试验结果:各药物试验组投喂10天治疗效果见表2。
表2 治疗试验结果
试验组 症状完全 平板凝集反 数死亡数 治愈率 总有效率 死亡率
消失只数 应阴性只数 (只) (%) (%) (%)
黄芩提取物 30 28 0 93.3 100 0
普乐健 29 27 1 90 96.6 3.3
环丙沙星 26 25 1 83.3 86.6 3.3
庆大霉素 25 20 3 66.6 83.3 10
痢特灵 14 12 6 40 46.6 20
土霉素 13 12 8 40 43.3 26.6
对照组 — — 24 — — 80
就各试验组治愈率作差异显著性检验,黄芩提取物试验组对普乐健试验组、环丙沙星试验组、庆大霉素试验组P>0.05,治愈率差异不显著;对痢特灵试验组、土霉素试验组P<0.01,治愈率差异极显著。由此可见上述6种供试药品,以黄芩提取物、普乐健、环丙沙星3种药物治疗鸡白痢效果较好。
3 小结
3.1鸡白痢是一种由鸡白痢沙门氏菌引起的常见和多发性传染病,它既能经蛋垂直传播,也能相互水平传播。该病主要侵害幼雏鸡,其发病率和死亡率都较高,并且在许多地区不断发生和流行,严重困扰养鸡业的发展。传统治疗方法是在饲料中添加抗菌化学药物或抗生素类药物,长期应用该类药物不仅破坏了鸡消化道的正常菌群,造成药源性疾病和药物残留,而且能导致耐药菌株的产生,防治效果不佳,即增加养殖成本,还造成药残超标。因此,养鸡生产中应尽量减少抗菌化学药物或抗生素类药物的应用,采用高敏低残留中草药物制剂增强疫病防治效果,提高肉鸡产品质量。
3.2 通过实验表明 鸡白痢沙门氏菌对黄芩提取物、普乐健、环丙沙星敏感,治疗效果也可以;另外两种抗菌药物敏感性低,治疗效果也较差,这说明鸡白痢沙门氏菌对长期应用的抗菌药物已经产生了耐药性。黄芩提取物对鸡白痢沙门氏菌不仅体外抑菌效果好,而且治疗效果也很好,并且价格低,无残留无毒副作用,是防治鸡白痢首选药物。
3.3 从抑菌实验结果与治疗实验结果对比来看,庆大霉素治疗组体外抑菌实验与实际治疗效果相差较大,因为其内服很少吸收,血液中药物维持浓度较低,故对全身治疗效果较前两种药物差。所以在临床治疗上应该筛选高度敏感且吸收良好的药物。
3.4 黄芩提取物的主要成分是黄芩甙、黄芩素,黄芩甙具有较强的抑菌作用,对痢疾杆菌、绿脓杆菌、肺炎双球菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌等都有抑杀作用。本次试验证明对鸡白痢沙门氏菌具有抑杀作用,为我们治疗本病提供了实验依据。同时,它还具有抗病毒作用。在临床上,我们采用黄芩提取物治疗肉鸡的细菌和病毒引起的混合感染,也取得了满意效果。另外,黄芩素具有解热退烧作用,对病鸡体况恢复有良好作用。
3.5 黄芩提取物生产工艺简单,易于推广应用。其工艺流程为:黄芩→挑选→蒸煮→切片→微沸煎煮→过滤→滤液静置→抽上清液调pH值→静置→产生沉降物→离心→真空干燥→粉碎成粉末→黄芩提取物成品制成(含纯品90%左右,与生药量之比为1∶10)。
3.6 用黄芩提取物治疗肉仔鸡白痢试验取得了令人满意的效果,克服了用抗生素等引起的药残问题,避免了耐药菌株的产生。在兽医临床上,黄芩提取物可按每日每只0.1 g(相当于1 g生药)投喂,而且经济实惠。因此,黄芩提取物治疗肉仔鸡白痢具有较高的推广价值。