降香为豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T.Chen 树干和根的干燥心材, 性温、味辛, 归肝、脾经,能行气活血、止痛、止血, 用于脘腹疼痛, 肝郁胁痛、胸痹刺痛、跌打损伤、外伤出血等症。为控制降香油质量, 本实验采用GC法对降香药材经超临界CO2萃取所得的降香油中有效成分之一橙花叔醇进行测定。该法灵敏、简便、准确和重现性好, 可作为该原料的质量控制。
1 仪器与材料
HP5890A气相色谱仪,氢离子火焰检测器(FID),泰立TL-9900色谱数据工作站,BP210D型电子天平(Sartorius司)。醋酸乙酯(分析纯),正十四烷(色谱纯)。降香油由广州中医药大学提供。橙花叔醇对照品为自制, GC归一化法测得其纯度为98.15% ,广东药学院中心实验室提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性: 色谱柱:SE-30石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);检测器(FID)温度:300℃;进样品温度:200℃; 柱头压:90～85kPa; 尾吹20mL/min;柱流量:1.3mL/min;总流量: 20mL/min;柱温:115℃,停留39min,以20℃/min 升温至160℃,停留14min。正十四烷为内标峰, 橙花叔醇峰的理论塔板数为65712,与其前后峰分离度分别为2.9、5.0,说明在此色谱条件下,样品能很好地分离。
2.2 对照品溶液的制备:精密称取橙花叔醇对照品29.36mg, 置25mL量瓶,加醋酸乙酯溶解并加至刻度,即得。
2.3 内标液的制备:精密称取正十四烷255.32mg,加醋酸乙酯溶解并定容至100mL,即得。
2.4 供试品溶液的制备:精密称取降香油30mg, 加入2.5mg/mL 正十四烷内标液2.0mL,用醋酸乙酯溶解,并定容至20mL,制成1.5mg/mL的样品溶液。
2.5 线性关系考察: 精密称取1.1744mg/mL橙花叔醇对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL,分别加入2.5mg/mL正十四烷内标液2.0mL,用醋酸乙酯溶解并定容至20mL,取1μL进样。以橙花叔醇峰面积与内标峰面积比对进样浓度进行线性回归,得回归方程:Y=0.01275+0.002715X,r=0.9998,结果表明橙花叔醇在58.72～587.2mg/mL与峰面积比呈良好线性关系。
2.6 精密度试验:取1.1744mg/mL橙花叔醇对照品溶液6mL, 加入正十四烷内标液(2.5mg/mL)2mL,用醋酸乙酯溶解并定容至20mL , 取1μL连续进样6 次, 测定橙花叔醇与内标物峰面积比值,其RSD为1.05%。
2.7 重现性试验:精密称取30mg降香油,各6份,制备供试品溶液, 依法测定橙花叔醇含质量分数, 其RSD为0.98%。
2.8 稳定性试验: 取供试品溶液在0、2、4、6、8、12h进样1μL,连续进样6 次,以橙花叔醇质量分数计,其RSD 为2.03%。表明样品在配制12h内测定, 稳定性良好。
2.9 加样回收率试验: 精密称取5 份降香油, 各15mg, 分别加入2.0 mL,2.5mg/mL正十四烷内标液和3mL, 1.1716mg/mL橙花叔醇对照品溶液,制备供试品溶液, 依法测定橙花叔醇的质量浓度,计算回收率,结果平均回收率为100.71% , RSD 为2.11%。
2.10 样品的测定:分别称取5个批号的降香油适量,制备供试品溶液,依法测定橙花叔醇含量,
3 讨论
本实验建立毛细管气相色谱测定法,具有精密度高、重现性和稳定性好等优点,可作为降香质量控制的方法之一。
