摘要:目的:采用高效液相色谱法测定羟甲烟胺的含量。方法:以C18化学键合硅胶柱分离羟甲烟胺, 以甲醇-磷酸二氢钠(pH=6.0)(10:90)为流动相,UV检测波长261nm 进行测定。结果:平均回收率为99.76%,RSD为0.29%(n=5)。羟甲烟胺进样量与吸收峰面积呈良好的线性关系。线性范围0.1~0.6mg/ml。结论:该方法测定羟甲烟胺的含量,结果准确,重现性好。
关键词:HPLC;羟甲烟胺;含量测定
羟甲烟胺为利胆保肝药,并具有抑菌作用,临床上广泛用于胆囊炎、胆管炎,亦可用于病毒性肝炎的辅助治疗。国家药品标准中用碘量法测定其含量。本文试用高效液相色谱法测定羟甲烟胺的含量,取得满意的效果。
1 仪器与试药
岛津LC-10AD高效液相色谱仪,岛津SPD-1OAV紫外检测器,色谱工作站:天津奥特赛恩斯。羟甲烟胺对照品(自制,含量为99.8%),羟甲烟胺为山东山大康诺制药有限公司生产(批号040508 040510 040512),甲醇为色谱纯,磷酸二氢钠为分析纯。,
2 实验方法
2.1色谱条件色谱柱:BDS-C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-磷酸二氢钠(pH=6.0)(10:90);流速:1.0ml/min;检测波长:261nm;柱温:30℃。
2.2 溶液配制
2.2.1对照品溶液:取105℃干燥2h的羟甲烟胺对照品约0.1g,精密称定,置100ml容量瓶中,加甲醇适量,振摇使溶解,加甲醇稀释至刻度,摇匀。超声5min,用甲醇定容,作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液10ml至50ml量瓶中用甲醇稀释至刻度。
2.2.2供试品溶液:取研细的本品约1g,精密称定,置25ml量瓶中,加适量甲醇溶解并稀释至刻度,超声处理5min,放冷,用甲醇定容,过滤,弃去初滤液,取续滤液。即得。
2.3系统适用性试验分别取对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图。羟甲烟胺峰保留时同约为6.5min,理论塔板数以羟甲烟胺峰计算为4300。
3 实验结果
3.1线性关系试验 精密量取对照品贮备液(1mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.Om1分别置lOml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。每个浓度点进样两次测定,各进样10μl,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标进行线性回归,得回归方程为:Y=0.08041x一0.01456 r=0.9999,线性范围为0.1~0.6mg/ml。
3.2精密度考察 依次取同一对照品溶液(0.2mg/ml)连续进样5次,每次10μl,峰面积积分值得RSD=0.24%。
3.3重复性试验 取同一羟甲烟胺样品5份,按供试品液制备方法制备,依法测定。结果羟甲烟胺含量RSD为0.37%,表明本方法重现性好。
3.4稳定性试验 取同一样品溶液(批号040508),在0、1、4、12、24、48、72h分别进样10μl,依法测定,结果7次测定羟甲烟胺含量RSD为0.32%,表明样品溶液在3d内稳定。
3.5回收率试验 取羟甲烟胺对照品适量,按样品测定方法测定含量,计算回收率。
3.6样品测定 取浓度为0.2mg/ml的样品溶液用0.45μm微孔滤膜滤过,各进样lOμl,读取峰面积值,按外标法计算含量。
4 讨论
羟甲烟胺的流动相溶液置UV-2450分光光度计上,在200~400nm波长范围内扫描,结果在261nm的波长处有最大吸收,故本法的检测波长选用261nm。本实验采用高效液相色谱法测定羟甲烟胺的含量,方法操作简便,结果准确,重现性好,灵敏度高,可作为实际生产中质量控制的方法。