3注射用双连翘的研究进展
3·1 注射用双连翘的试验研究
3·1·1注射用双连翘的毒性研究
张国红等（2003）将小白鼠随机分成5组，每组10只，雌雄各半，分别按7510mg/Kg、10013mg/Kg、13351 mg/Kg、17801mg/Kg、23735mg/Kg（等比系数为0.75）于小白鼠后肢大腿肌肉注射注射用双连翘。给药后，连续7d分别观察小白鼠的精神活动，饮、食欲及死亡情况。对死亡小白鼠进行剖检，肉眼观察各组织、器官的病理变化。用简化寇氏法计算LD50。结果LD50的95%可信限为16440-12720mg/Kg，是临床用量的127-164倍，可谓毒性甚微。兔点眼法、兔耳廓皮下注射法及小鼠腹腔注射法测定注射用双连翘的刺激性，结果显示没有刺激反应；溶血试验表明无溶血现象。研究结果证实注射用双连翘安全、无毒副反应。
3·1·2 注射用双连翘的稳定性研究
张国红等（2001）将注射用双连翘成品3批贮藏于实验室通风、阴凉、干燥处，观察药品的外观性状，每3个月抽查一次，观察2年。结果自然存放的药品瓶中粉末蓬松，色泽如初，无结块吸潮现象。用蒸馏水稀释后清澈透明，无沉淀发生，PH值为5.0-7.0。细菌培养阴性。采用薄层色谱法对注射用双连翘的主要组成-金银花及连翘进行检测，均可看到清晰的斑点。以上结果说明，该产品稳定性良好，符合2000版《中华人民共和国兽药典•二部》附录第5页中粉针剂的有关规定。
3·1·3注射用双连翘的体外抗菌活性试验
张国红等选用兽医临床上常见的病原菌猪大肠杆菌O149、猪放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌C44-1、猪沙门氏菌C78-2、长鸽产气荚膜梭菌、猪链球菌C55150、猪金黄色葡萄球菌、牛金黄色葡萄球菌、猪胃肠炎、肺炎克雷伯、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房炎链球菌、绿脓杆菌、猪丹毒杆菌等，对注射用双连翘与青霉素进行了体外抑菌比较试验。
3注射用双连翘的研究进展
注射用双连翘和青霉素抗菌作用的比较（MIC值，ug/ml）(略)
3·1·4 注射用双连翘抗感染作用的实验研究
张国红等（2002）将大肠杆菌注入小鼠的膀胱后观察注射用双连翘对细菌上行感染肾脏的抑制作用；家兔静脉注射大肠杆菌内毒素后观察药物对细菌内毒素引起机体发热的影响；采用大鼠足趾炎性肿胀模型观察药物对炎性肿胀及机械压迫足趾疼痛的抑制作用。结果注射用双连翘可显著降低大肠杆菌对动物机体的影响，抑制大肠杆菌内毒素诱发家兔体温升高，减轻大鼠足趾炎性肿胀及致炎后肿胀部位机械压迫痛阈降低程度.中国兽药114网。结果表明注射用双连翘各剂量组小鼠带菌肾剖面百分率均明显低于肾感染模型组，其中7-28mg/kg剂量组与肾感染模型组比较差异非常显著（P＜0.01）。注射用双连翘14mg/kg剂量组与庆大霉素组结果一致；21mg/kg和28mg/kg剂量组均明显低于庆大霉素组。经计算，注射用双连翘的ED50为（11.01±1.63）mg/kg，95%可信限为9.50-12.76mg/kg，相关系数r=0.967。家兔iv大肠杆菌内毒素致热后1-6h内，注射用双连翘各剂量组家兔肛温与致热前肛温差值均小于蒸馏水对照组，其中注射用双连翘5.0mg/kg、10.0mg/kg组1-6h内差值与蒸馏水对照组相比有显著性差异（P＜0.5或P＜0.01）；与阿司匹林对照组相比有显著性差异（P＜0.5）。致炎后1-6h注射用双连翘各剂量组大鼠右后足趾肿胀度均低于蒸馏水对照组，其中10mg/kg和20mg/kg剂量组在2-6h内与蒸馏水对照组相比有显著性差异（P＜0.5）。同时，注射用双连翘各剂量组大鼠右后足趾压痛阈在致炎后4h降低值均小于蒸馏水对照组，且与蒸馏水对照组相比均有显著性差异（P＜0.5）。
3·1·4连翘提取物的抗炎镇痛作用研究
张国红等对连翘70%甲醇提取物的消炎镇痛作用及其活性部位进行了研究。将连翘干燥果实的甲醇提取液、正己烷萃取甲醇提取液后所得到的正己烷可溶物和水可溶物分别进行真空冷冻干燥，得到3种棕色粉末状物质。结果甲醇提取物3 g/kg和正己烷可溶物0.2 g/kg剂量组，ig给药，与对照组相比，能抑制醋酸致小鼠腹腔的染料渗出作用，其抑制率分别达到52.6%和51.0%，且此两剂量组的作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组的作用强度相当；而水可溶物2.8 g/kg未显示此种作用。甲醇提取物3 g/kg剂量组ig给药，与对照组相比，1～6 h内均具有不同程度地抑制大鼠足跖肿胀作用，其中1～4 h的抑制作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组相比较大致相当，4 h后作用稍有减弱。另外，甲醇提取物1 g/kg剂量组与对照组相比，在3、5和6 h有明显抑制作用。甲醇提取物3g/kg剂量组连续5 d ig给药，与对照组相比，对棉球肉芽组织增生有一定程度的抑制作用，但体重的变化与对照组相比无显著性差异。甲醇提取物3g/kg和正己烷可溶物0.2g/kg剂量组ig给药，与对照组相比，能抑制小鼠扭体反应次数，抑制率分别为49.5%和48.0%，且此两种剂量组的抑制作用强度和消炎痛0.01g/kg剂量组的作用强度相近；水可溶物2.8g/kg无此作用。可见连翘中抗炎活性物质可用甲醇提取，再用正己烷萃取提纯。另外，由醋酸致小鼠扭体反应实验表明，甲醇提取物和正己烷可溶物能明显降低扭体次数，具有镇痛作用。而水可溶物却无此作用。
张国红等选取60头实验仔猪随机分成6组，每组10头，编号、称重，分别饲养于6栏。除阴性对照组10头不予攻毒外，其余50头猪分别滴鼻感染胸膜肺炎放线杆菌培养物0.5ml/kg后，随机分成阳性对照组，不予治疗；注射用双连翘低、中、高剂量治疗组，在猪出现气喘、呼吸急促、呈犬蹲姿势和体温超过40℃后，分别肌肉注射注射用双连翘无菌水溶液0.1ml/kg（5mg/kg）、0.20ml/kg（10mg/kg）和0.3ml/kg（15mg/kg），1次/日，连续用药3天。发病特别急，病情危重的猪，在第1次给药后12h和第4天，各追加给药1次；药物对照组发病后，肌肉注射盐酸土霉素注射液0.6ml/kg/头，1次/日，连用5天。结果实验的阳性对照10头猪全部发病，8头死亡，与有关报道该病的发生率和死亡率分别在8.5%~100%和0.4%~100%之间的结果相符；以及阴性对照10头猪均未发病，实验结束时胸膜肺炎放线杆菌分离全部阴性，说明该人工感染实验是成功的，实验猪、饲养、菌种及其攻毒量等条件的控制是严格的，其结果是可信的。注射用双连翘3个剂量组均可降低人工感染猪放线杆菌性胸膜肺炎的死亡率，增加感染猪的生存总天数；但只有10mg/kg和15mg/kg组具有统计学意义，5mg/kg组无显著性差异。不同剂量组之间及5mg/kg和10mg/kg组与对照药土霉素治疗之间，无显著性差异，只有15mg/kg组较土霉素治疗之间有显著性差异。注射用双连翘3个剂量组均可显著减少人工感染猪放线杆菌性胸膜肺炎的病理损害积分，但3个剂量组之间无显著性差异；且5mg/kg和10mg/kg组与对照药土霉素治疗之间亦无显著性差异，只是15mg/kg组较土霉素治疗之间有显著性差异。注射用双连翘3个剂量组肺组织胸膜肺炎放线杆菌的分离阳性率均在50%左右，经统计学处理，5mg/kg组与阳性对照组比较，无显著性差异；但10mg/kg和15mg/kg组与阳性对照组比较，可显著减少胸膜肺炎放线杆菌的分离阳性率。综上所述，注射用双 连翘在降低人工感染猪放线杆菌性胸膜肺炎的死亡率、增加感染猪的生存总天数、减少人工感染猪放线杆菌性胸膜肺炎的病理损害积分、减少感染猪的胸膜肺炎放线杆菌分离的阳性率等方面，具有显著的作用，临床推荐剂量以10mg/kg为宜。
此外，张国红等（2003）在188头患有放线杆菌胸膜肺炎的自然病例猪体上采用注射用双连翘进行治疗，并与红霉素的治疗效果进行了比较。结果显示注射用双连翘试验组较之红霉素对照组提前2天控制病情，缩短疗程2天，也为临床治疗本病赢得时间。注射用双连翘治疗组的猪群于药后第7日就基本痊愈，而红霉素对照组在药后第9日仍有部分猪只尚待治疗，显示出注射用双连翘在治疗猪体放线杆菌胸膜肺炎病症方面的药效学优势。注射用双连翘药物组治愈率为84.96%，而对照药物组红霉素治愈率仅有53.03%。治疗试验结果表明，每千克体重肌肉注射注射用双连翘10mg，每日1次，连用5—7天，对猪体放线杆菌胸膜肺炎疗效快，治愈率高。整个治疗试验期间，未见猪只出现任何不良反应及毒副作用，愈后观察大多数猪只发育正常，生长良好，但个别重症猪愈后肺部留有终身残疾，这属病理特性并非药物缺陷。王刚等（2002）用注射用双连翘对猪流感进行治疗试验，结果表明单用注射用双连翘有效率和治愈率达到96.5％和90.2％，治疗效果明显。而与华西经典粉针（氨苄青霉素）配合使用有效率和治愈率达到98.6％和98.0％，治疗效果更佳。此外经对猪肺疫、链球菌病、喘气病、传染性胸膜肺炎等疾病的治疗效果观察，结果表明以10mg/kg体重肌肉注射，每日用药一次，连用2-3次，可获得令人满意的效果。
4、金银花、连翘、板蓝根复方制剂在兽医上的研究进展
张丽云等（2001）应用银翘解毒合剂（金银花、连翘、板蓝根等9味中药制备），对鸡传染性法氏囊病、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、非典型新城疫的治愈率分别为90.9%、90.0%、91.0%和90.5%。且能显著提高鸡T淋巴细胞转化率，同时又能降低其B淋巴细胞EAC花环形成率和γ-球蛋白，说明该合剂能显著提高机体的非特异性细胞免疫功能而抑制机体的体液免役水平。祝国强（2004）用黄连解毒汤（连翘、板蓝根、金银花等7味中药制备）对鸡IBD做治疗试验和抑制IBDV致鸡胚死亡试验。结果表明黄连解毒汤对人工致病的IBD的治愈率为83.3%，差异显著（P<0.05）；临床治疗治愈率为90.2%。抑制IBDV致死鸡胚效果明显。
《中华人民共和国兽药典·二部》（2000年版）已经收载含连翘、板蓝根或金银花、板蓝根的成方制剂有“公英散”（功能清热解毒、消肿散痈）、“双黄连口服液”（功能辛凉解表、清热解毒）、“荆防败毒散”（功能疏风清热、凉血解毒）、“银翘散”（功能辛凉解表、清热解毒）、“清肺止咳散”（功能清泻肺热、化痰止咳）和“普济消毒饮”（功能清热解毒、疏风消肿）等6个产品。目前，国内有以双花、连翘、板蓝根为主药的成品兽药使用，如潍坊六和动物科技有限公司的呼感宁（主要成分：连翘、紫苑、板兰根）、内蒙古富方泰药业有限公的连翘败毒片（主要成分：金银花、连翘、大黄、紫花地丁、蒲公英等）、重庆天龙牧业有限公司的乳炎康注射液（主要成分：黄芩、连翘、双花等）、福建金谷科技开发有限公司的双黄连口服液（主要成分：金银花、黄芩、连翘的提取液）等。但是，尚没有发现以双花、连翘、板蓝根的全提取物为主要成分的注射用粉针剂，也没有发现兽用中药粉针剂的报道。
综上所述，注射用双连翘的开发具有良好的技术基础和市场前景，成功开发注射用双连翘具有非常重要的学术意义和推广应用价值。
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