子宫积液是犬常见的产科疾病。根据B 超图像特征结合临床症状, 可将子宫积液大致分为二类: 一是子宫积水, 子宫壁很薄, 宫腔内液体回声很低(暗区) ,除有的病例腹围增大外, 一般无临床症状; 二是子宫积脓, 子宫壁较厚, 宫腔内液体部分有一定强度的回声, 多数病例有临床症状, 如食欲不佳, 体温升高, 精神不振, 行为反常等。
犬子宫积液及子宫积脓已成为影响犬繁殖能力和引起犬死亡的疾病之一。通过临床疾病诊治的记录可以看出, 犬子宫积液发病率逐渐提高, 发病年龄也由老犬向青年犬过渡, 对此为防止本病的扩大, 本试验采集临床病犬子宫积液病料, 进行细菌的分离、鉴定, 确定子宫积液中的病原菌及这些细菌与子宫积液之间的关系, 为探明其发病机理和临床上更好地防治本病提供了理论依据。
1、实验材料与方法
1. 1 试验病料 子宫内容物来源于东北农业大学动物医院就诊的病犬, 选择临床症状符合子宫积液的病例。经过体检、血液学检验和超声波检查确诊后对其实施卵巢子宫切除术获得子宫及其内容物。共采集5只犬的病料。
1. 2 培养基及试剂 分离培养基为普通琼脂培养基、羊鲜血琼脂培培养基、鲜血2葡萄糖琼脂培养基、营养肉汤和血清肉汤、麦康凯琼脂培养基; 生化鉴定培养基及试剂为尿素酶高层斜面、明胶培养基、蔗糖、乳糖、葡萄糖发酵管、葡萄糖蛋白胨水、甲基红试剂、V 2P 试剂、吲哚试剂、过氧化氢试剂、硫化氢试剂和枸橼酸盐试剂等。
1. 3 试验方法
1. 3. 1细菌的分离
由于脓汁的含菌量较多, 采用分区划线法将病料接种到灭菌羊血营养琼脂培养基和普通琼脂培养基并于37℃培养24 h, 用革兰氏染色法涂片镜检, 观察。同时分别挑取单个菌落接种于麦康凯培养基后观察。
1.3. 2 细菌的纯化
将挑选出来的细菌, 按革兰氏染色特点和细菌的形态分类, 再次接种于普通鲜血琼脂培养基上培养纯化, 纯培养后镜检无杂菌者保存于斜面保菌培养基中, 经37℃培养8～ 24 h, 再置于4℃冰箱保存。以备生化鉴定。
1.3. 3 细菌的生化鉴定
主要的生化试验有革兰氏染色、溶血试验、各种糖发酵试验、过氧化氢试验、甲基红试验、V 2P 试验、吲哚试验、硫化氢试验、明胶液化试验、尿素酶试验、石蕊牛乳试验和枸橼酸盐试验。
2、试验结果
2. 1 分离培养的结果 肉汤均匀浑浊, 有絮状沉淀,液面有菌环。在普通琼脂上培养可见圆形、稍隆起、表面光滑、边缘整齐、无色或接近灰白色的菌落。血琼脂平板上生长形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落, 直径为2～ 3 mm。在麦康凯琼脂上形成红色菌落。
2. 2 生化鉴定的结果 经革兰氏染色可见革兰氏阴性的短杆菌, 两端钝圆。散在或成对存在。C型溶血,无溶血环。生化鉴定的结果见表1。
表1 革兰氏阴性杆菌的鉴定结果（略）
2.3细菌鉴定结果 经分离培养和生化鉴定, 查细菌鉴定手册第8 版确认, 分离出的是埃希氏大肠杆菌。经分离培养和生化鉴定, 5 种病料结果均为埃希氏大肠杆菌。
3 、讨论
3. 1 细菌的致病性和来源
大肠杆菌是人和温血动物肠道正常菌群, 随粪便排出体外, 也是环境常在菌。试验所分离出的埃希氏大肠杆菌毒力很弱, 是一种条件致病菌, 受到某些诱发因素的刺激下, 就可能导致宿主内环境发生异常, 引起发病。正常生理情况下犬阴道内也存在这些常在菌, 从阴道正常菌群中分离出大肠杆菌和子宫内分离出的大肠杆菌属同种类型。在发情前期和发情期细菌通过子宫颈进入子宫,造成污染, 是一种正常现象。由于发情期时犬的子宫颈处于开放状态, 此时阴道的常在菌有很大机会进入子宫, 如果此时子宫内膜已经处于增生的状态, 则入侵的细菌很可能会导致子宫内的炎症过程, 促进子宫积液的发生。
3. 2 细菌与子宫积液的关系
等均用机械划伤的方法成功造成黄体期子宫内膜的局部增生, 将从子宫积液犬的子宫中分离出的埃希氏大肠杆菌接种到这些犬的子宫腔内, 结果有很大比例的犬可以发展为子宫积液。因此他们断定, 一定存在某些与子宫内膜创伤或刺激有关的因素, 与细菌共同作用, 产生了引发子宫积液的适宜刺激。现已证明这种影响因素就是孕酮和雌激素。显然长期或反复因孕酮和雌激素刺激引起子宫病理性变化是子宫积液发生的主要机制和初始原因。虽然细菌尤其大肠杆菌是子宫积液中经常分离到的细菌, 但其不可能是发生子宫积液的初始原因, 因为正常犬子宫污染时并不会引起该病。而且子宫积液初期子宫内容物常为无菌状态, 只有子宫内膜被某些因素如孕酮、雌激素等预处理后, 造成黄体期子宫内膜的局部增生, 子宫内膜的腺体会产生大量分泌物, 才有利于细菌的入侵和大量繁殖, 然后细菌才分泌毒素并刺激子宫内膜, 促进子宫积液量的增加而引起疾病的进一步发展。
3. 3 只分离出大肠杆菌的可能原因
一是子宫的防御机制, 在疾病的初期细菌侵入子宫后, 机体释放各种激素如雌激素, 它可提高白细胞向子宫腔移动的速率, 增加子宫腔杀菌的能力, 这样某些细菌就可能被子宫的一些防御机制所清除。二是子宫中的无菌环境可能与抗生素的应用有关, 因为病犬发病后采用过抗生素治疗, 降低了细菌的检出率。而子宫内膜和子宫肌层内存在特异性的大肠杆菌受体, 从理论上增加了其在子宫内建群的可能性, 所以最终只有大肠杆菌被检出。
3. 4 发病的主要原因
由试验结果看, 5 只病犬的病料经分离鉴定均为大肠杆菌, 而大肠杆菌又不能直接引发子宫积液, 由此看子宫积液的主要发病机制还应是长期或反复孕酮刺激和雌激素的共同作用的结果。细菌作用只不过是一种继发因素。
