1. 直接接种法
(1) 供试品如为注射液、供角膜创伤及手术用的滴眼剂或灭菌溶液, 任取供试品2支(瓶)以上,用适当消毒液清洁供试品容器的外表面后,以无菌操作吸取规定接种量的供试品溶液,分别接种于需气菌、厌气菌培养基5管,其中1管接种对照用菌液1ml,供作阳性对照;取1支需气菌、厌气菌培养基管作阴性对照,另接种于霉菌培养基2管,供试品溶液的每管接种量与培养基的分装量,应根据供试品的装量,按下列规定取用: 供试品装量 每管接种量 培养基分装量 2ml或2ml以下 0.5ml 15ml 2ml以上至20ml 1.0ml 15ml 20ml以上 5.0ml 40ml 接种后轻轻摇动,使匀。需气菌、厌气菌培养基在30~35℃培养5日, 霉菌培养基在20~25℃培养7日,抗生素类药品均培养7日,放射性药品培养5~7日。培养期间应逐日检查是否有菌生长(阳性对照在24小时内应有细菌生长);如在加入供试品溶液后,培养基出现浑浊或沉淀,经培养后不能从外观上判断时,可取该培养液转种入另1支相同的培养基中或斜面培养基上,培养48~72小时后,观察是否再现浑浊或在斜面上有无菌落生长,并在转种的同时,取培养液少量,涂片制成染色标本,用显微镜观察是否有菌生长。
(2) 供试品如为注射用灭菌粉末或无菌冻干品,照该药品项下的规定或按该药品剂量项下的溶剂用量,加入灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液,使内容物溶解成均匀的供试品溶液,取规定接种量的供试品溶液,接种于上述培养基中。
(3) 供试品如为供直接分装成注射用无菌粉末的原料药,按各药品项下的规定制成溶液,依法接种于培养基中。
(4) 供试品如为外科敷料,取供试品2个包装,以无菌操作拆开包装, 于不同部位剪取约1cm×3cm的样品,分别接种于40ml培养基中。
(5) 供试品如有抑菌作用或含有抑菌物质时,可选用适宜的培养基,或种入较大量的培养基中,使该供试品稀释至不具有抑菌使用的浓度;或照下述“薄膜过滤法”处理并接种于培养基中。
(6) 供试品如为抗生素药品,取该品种正文中最大规格量的供试品不少于2瓶(支)。原料药按制剂规格项下,取最大规格量2份,分别加入足够使青霉素灭活的无菌青霉素酶溶液适量,摇匀,分别等量接种于每管装量为40ml的培养基中。
(7) 供试品如为放射性药品,取供试品1瓶(支),以每管接种量为0.2ml,接种于每管装量为7.5ml的培养基中。
2. 薄膜过滤法
(1)供试品如为抗生素药品,取该品种正文中最大规格量的供试品不少于2瓶(支)。原料药按制剂规格项下取最大规格量2份, 分别按该药品项下规定的方法处理后, 加入0.9%灭菌氯化钠溶液至少100ml或其他适宜的溶剂中, 摇匀, 以无菌操作加入装有直径约50mm、孔径不大于0.45±0.02μm微孔滤膜的薄膜过滤器内,减压抽干后, 用0.9%灭菌氯化钠溶液或其他适宜的溶剂冲洗滤膜3次,每次至少100ml;取出滤膜,分成4片,取3片分别放在3管各40ml需气菌、厌气菌培养基中,其中1管接种对照用菌液1ml,供作阳性对照,另1片放在霉菌培养基管中。取1支需气菌、厌气菌培养基管作阴性对照。
(2) 供试品如为抗厌氧菌药品, 取规定量的供试品, 按上述方法经薄膜过滤器处理后,取出滤膜,分成4片,其中3片放在3管需气菌、厌气菌培养基管中, 1管接种生孢梭菌对照用菌液1ml,供作阳性对照。另1片放在霉菌培养基管中。 取1支需气菌、厌气菌培养基管作阴性对照。
(3) 供试品如为抗真菌药品,取规定量的供试品,按上述方法经薄膜过滤器处理后,取出滤膜,分成4片,取2片分别放在2管需气菌、厌气菌培养基管中;2片分别放在2管霉菌培养基管中,其中1管接种白色念珠菌对照用菌液1ml,供作阳性对照。取1支需气菌、厌气菌培养基管作阴性对照。 结果判断 当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长,阴性对照管阴性时, 可根据观察所得的结果判定:如需气菌、厌气菌及霉菌培养管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长,均应判为供试品合格;如需气菌、厌气菌及霉菌培养管中任何1管显浑浊并确证为有菌生长,应重新取样,分别依法倍量复试,除阳性对照管外,其他各管均不得有菌生长,否则应判为供试品不合格。