鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（La Sota株+H120株）

“鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（La Sota株+H120株）”由南京天邦生物科技有限公司、国家兽用生物制品工程技术研究中心和江苏省农业科学院兽医研究所根据市场需求共同研制，于2015年取得国家三类新兽药注册证书“证号：（2015）新兽药证字41号”。

我国现阶段常用的生物制品保护剂主要为 5%的蔗糖脱脂牛奶和1.5%-3.0%明胶，一般此类生物制品要求低温保存，在常温下要求尽快用完。而耐热冻干保护剂更全面地考虑了具有生物活性的制品在较高温度和较长保存时间的情况下冻干物质可能产生的物理和化学变化对活疫苗存活的影响。耐热保护剂更能有效地保护疫苗，使保存时间更长，大大提高了疫苗的免疫成功率和免疫保护率。

鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（La Sota株+H120株）系采用鸡新城疫病毒弱毒La Sota株、传染性支气管炎病毒弱毒H120株，分别以适宜稀释度的病毒接种SPF鸡胚，收获感染胚液，取经检验合格的两种病毒液按适当比例混合，加入一定量特定配方耐热保护剂，经冷冻真空干燥制成。该疫苗用于预防鸡新城疫、鸡传染性支气管炎。

与传统的蔗糖牛奶保护剂不同，该疫苗解决了传统冻干活疫苗对贮藏、运输等冷链要求较高的问题，使冻干疫苗在2-8℃条件下，保存期能达到24个月。

一、主要成分及其作用

鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（La Sota株+H120株）系用鸡新城疫病毒弱毒La Sota株、传染性支气管炎病毒弱毒H120株，分别以适宜稀释度的病毒接种SPF鸡胚，收获感染胚液，取经检验合格的两种病毒液按适当比例混合，加入一定量特定配方耐热保护剂，经冷冻真空干燥制成。

1.毒种来源可靠

制造本品用的毒种为鸡新城疫病毒弱毒La Sota株，鸡传染性支气管炎病毒弱毒H120株；效检用强毒鸡新城疫病毒北京株，鸡传染性支气管炎病毒M41株，均从中国兽医药品监察所引进。经SPF鸡胚复壮、扩繁，鉴定合格后建立生产和检验用种子批。

2.抗原制备符合相关规定

均选用健康的SPF胚作为制苗材料，按照《鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗制造及检验规程（草案）》要求制备鸡新城疫病毒La Sota株鸡胚液与鸡传染性支气管炎病毒H120株鸡胚液，与《规程》（二OOO年版）中“鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗制造及检验规程”相一致。生产的抗原按《中国兽药典》无菌检验的方法进行检验，无细菌、霉菌生长；同时测定病毒含量，鸡新城疫病毒La Sota株，每0.1ml≥108.0/EID50，鸡传染性支气管炎病毒H120株，每0.1ml≥106.0/EID50。

3.耐热保护剂配置优良

为了提供对疫苗的良好保护，减少疫苗的冻干损失、保存和运输过程病毒的毒力的下降，我们调试出一组配方，主要组分为明胶、蔗糖、乳糖、谷氨酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、蛋白胨等。根据各主要成分的理化性质，保护剂分保护剂组分I（过滤除菌）、保护剂组分II（116℃高压30分钟进行灭菌），二者按1︰4混合后，用于疫苗的配制。

二、产品特点

1.安全性好

对实验室制品进行一次单剂量接种、单剂量重复接种和超剂量（点眼、滴鼻10倍剂量、饮水20倍剂量）接种的安全性试验。结果，接种鸡和对照鸡饮食、呼吸均正常，未见呼吸症状或神经症状等任何异常临床反应，表明该疫苗对于4-7日龄鸡是安全的。

2.免疫效力好

效力检验 分别用鸡胚和鸡进行效力检验，并与同种类的常规二联苗（La Sota+H120株）、新城疫耐热单苗（La Sota株）及传染性支气管炎耐热单苗（H120株）相比较。经鸡胚测定鸡新城疫抗原的含量均大于106.0EID50/羽份，鸡传染性支气管炎的抗原含量均大于103.5 EID50/羽份；各组鸡只免疫后用鸡新城疫北京株强毒攻毒，对照鸡全部发病死亡，免疫鸡9/10以上获得保护；用鸡传染性支气管炎病毒强毒M41株攻毒，对照鸡9/10发病，免疫鸡10/10保护。说明该实验室制品与常规二联苗（La Sota+H120株）、新城疫耐热单苗（La Sota株）及传染性支气管炎耐热单苗（H120株）效力相当，均符合现行《中国兽药典》质量标准的规定。

免疫期 将三批实验室制品分别接种7日龄SPF鸡，并于免疫后5、7、14、21、30、45、60、75日检测血清中的鸡新城疫、传染性支气管炎HI抗体，同时在免疫后5、7、60、75日进行攻毒试验。结果，免疫后7日，血清中的新城疫HI抗体达到4.0 log2以上，攻毒保护率在90%以上，传染性支气管炎HI抗体达到3.1log2以上，攻毒保护率在80%以上；免疫后21-30日，新城疫HI抗体达到高峰，在7.0 log2以上；免疫后30-45日，传染性支气管炎HI抗体达到高峰，在4.8 log2左右；免疫后60日，新城疫HI抗体下降至4.7-5.0 log2，但攻毒保护率为100%；免疫后75日，传染性支气管炎HI抗体下降至3.3-3.8 log2，攻毒保护率在60%以上。说明，该疫苗免疫7日就能对鸡新城疫强毒、传染性支气管炎强毒提供有效保护；免疫后2个月以上免疫效果依然良好。为了保证鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热活疫苗对鸡只的有效保护，我们将该疫苗的免疫期定为2个月。

3.保存期长

在2-8℃条件下保存27个月后，疫苗的物理性状、水分含量、安全检验、鸡效力检验、病毒含量，均符合现行《中国兽药典》的相关规定，各项质量指标达到了现有新城疫耐热保护剂活疫苗（La Sota株）、鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗（H120株）的水平，且明显优于普通鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota+H120株）。为保证疫苗保存的可靠性，我们将疫苗在2-8℃条件下的保存期规定24个月。

4.耐老化效果好

按照通行的加速稳定性试验方法，将疫苗置37℃10日后进行毒价测定，结果：鸡新城疫病毒La Sota株的下降滴度为1.0-0.83，鸡传染性支气管炎病毒H120株的下降滴度为1.0-0.83，分别达到了现有的鸡新疫耐热活疫苗（La Sota株）、鸡传染性支气管炎耐热活疫苗（H120株）的耐老化试验质量标准，而普通的鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota+H120株）在经耐老化试验后疫苗效价下降严重，达不到质量标准的要求。因此，我们将疫苗在37℃放置10天，每羽份鸡新城疫和传染性支气管炎病毒含量下降均不超过1个滴度确定为该二联活疫苗耐老化试验标准。

三、作用研究

（一）与同类疫苗的保存期比较试验

1. 2-8℃保存期 将三批实验室制品（批号为20070501、20070602和20070603）与某厂家普通二联活疫苗（La Sota+H120株）及鸡新城疫耐热保护剂活疫苗（LaSota株）、鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗（H120株）产品，置2-8℃保存，分别于3、6、9、12、15、18、21、24、27个月测定各组分的病毒含量。结果，各批鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（La Sota+H120株）在2-8℃保存27个月后，鸡新城疫及传染性支气管炎的抗原含量分别为106.63EID50/羽份、103.78EID50/羽份，106.78EID50/羽份、103.83EID50/羽份，106.50EID50/羽份、103.63EID50/羽份，均达到质量标准的要求；而普通二联苗在保存6个月后，其鸡新城疫及传染性支气管炎的抗原含量分别为105.83EID50/羽份、103.38EID50/羽份，均达不到质量标准的要求。（见表1）

表1 2-8℃保存不同时间各批疫苗效力检测结果

2. 37℃耐老化 将三批实验室制品（批号为20070501、20070602和20070603）与某厂家普通二联活疫苗（La Sota+H120株）及鸡新城疫耐热保护剂活疫苗（LaSota株）、鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗（H120株）产品，置37℃保存，于保存后10天检测各组分的病毒含量。3批实验室制品及2批耐热单苗鸡新城疫抗原的下降滴度为1.0-0.83，传染性支气管炎抗原的下降滴度为1.0-0.83，而普通二联苗两种抗原的下降滴度均远远超过1。具体的检测结果见下见表2：

表2 耐老化试验结果

（二）临床安全性观察

5批鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（La Sota+H120株）中试产品，090701、090702、090803、090804和090805，分别以单剂量（滴鼻免疫每只鸡1个羽份，饮水剂量为2个羽份）、10倍剂量免疫，并设常规二联苗的免疫对照。免疫后，各组试验鸡只精神状态正常，无聚集、蜷缩、呼吸异常等现象，未引起采食量、饮水量下降，与同种类疫苗相比较其安全性很好。对临床上死亡的鸡只进行剖检，未发现由鸡新城疫、鸡传染性支气管炎引起的相关病变。对安全试验期间活鸡的剖检结果显示，各只鸡均安全，均未有鸡新城疫、传染性支气管炎相关的病变。（见表3）

表3 免疫后各组鸡只的安全性比较

（三）临床效力检验

5批鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（La Sota+H120株）中试产品，090701、090702、090803、090804和090805，分别以单倍剂量免疫，滴鼻免疫每只鸡1个羽份、饮水剂量为2个羽份，并设常规二联苗的免疫对照。蛋鸡在免疫后2周、8周，肉鸡在免疫后2周、6周，每组试验鸡各随机抽取40只，饲养于南京天邦生物科技有限公司强毒动物房隔离器内，分别用鸡新城疫（北京株）、鸡传染性支气管炎强毒（M41株）攻击，免疫鸡只都能抵抗鸡新疫、鸡传染性支气管炎强毒的攻击，对照SPF鸡攻击鸡新城疫强毒后100%发病死亡，攻击鸡传染性支气管炎的SPF鸡发病率在90%以上。具体的攻毒保护情况见下表4：

表4 各组试验鸡攻毒之后的保护情况（攻毒后健康鸡数/试验鸡数）

四、鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热活疫苗（La Sota株+H120株）的正确应用

1. 适用于7日龄以上鸡。按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水或适宜的稀释液稀释。点眼、滴鼻免疫，每只鸡1滴（0.03ml）；饮水免疫，剂量加倍，其饮水量根据日龄大小而定，一般5-10日龄每只5-10ml，20-30日龄每只10-20ml。

2.疫苗稀释后，应放冷暗处，必须在4小时内用完。

3.饮水免疫时，忌用金属容器，饮用前至少停水2-4个小时。