猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是猪场最主要的疾病问题。已经观察到,在一些感染猪场,保育猪的死亡率上升5-10%,增重速度下降达85%,而多达37%的猪最终不能上市。临床上,蓝耳病病毒和猪流感病毒二者最易相互作用,导致严重的呼吸道疾病。可用一种体外的方法-猪气管环(STR)培养来测定蓝耳病病毒分离株对呼吸道的致病性。在我们的研究中,我们试验了猪流感病毒单独接种,或猪流感与蓝耳病病毒联合接种,以分析二者对断奶仔猪的相互作用。
28头蓝耳病和流感阴性的4周龄仔猪,随机分成4组,分别饲养于完全隔离的猪栏。第1组和第2组分别接种高致病性和低致病性的蓝耳病病毒。1周后,滴鼻接种一种猪流感病毒田间毒株(H1N1变异毒株)。第3组8头仔猪只接种猪流感病毒,第4组3头仔猪作为对照。接种猪流感病毒后,每天采集鼻拭子,持续14天。试验期间,每周2次采集血样。第6、7、8、9周龄,3个感染组(第1、2、3组)每周每组分别杀猪2头,对照组每周杀猪1头。根据肺部背侧和腹侧的病变区域比例作病变记分(各肺叶权重分别是尖叶20%、心叶20%、膈叶50%、副叶10%)。猪流感病毒用鼻拭子样本,在加牛血清白蛋白的犬肾上皮连续细胞系(MDCK,Madin-Daby canine kidney cells)培养。蓝耳病病毒自血清分离,用Marc-145细胞培养。对每头猪的气管纤毛和杯状细胞的损伤进行检查。呼吸道纤毛的病变记分标准是:0分(无脱落)、1分(<30%脱落)、2分(30-70%脱落)、3分(超过70%脱落)。根据气管、支气管和肺泡的渗出、炎性反应的严重程度,将肺组织学按照0、1、2、3记分。并将肺泡隔的厚度记分来评估间质性肺炎的程度。
接种后第1天,部分猪只即可检测到猪流感病毒。在接种后第2-6天,大多数猪只都可检测到猪流感病毒。随后,猪流感病毒的检测比例开始下降,到第11天,流感病毒不能检出。蓝耳病病毒从接种后3天即可检出并持续3周。解剖上,第1组(高致病性蓝耳病+猪流感)肺部的大体病变比其它组更为严重,但第2组和第3组之间,肺部大体病变之间没有显著差异。组织学病变方面,第1、2、3组的纤毛病变评分无差异,但和对照组差异显著。由于纤毛的损伤,可见杯状细胞的数量减少。
3个接种组和对照组之间,肺部组织学病变存在显著差异,以第1组最为严重。第1组肺泡隔最厚(平均2.38),其次是第3组(1.63)和第2组(1.40),对照组的数值则是0。
在本次研究中,可以见到高致病性蓝耳病病毒和猪流感病毒之间存在明显的致病性协同增强现象,而低致病性蓝耳病病毒和猪流感病毒之间未见致病性增强。在生产现场,蓝耳病病毒的致病性千差万别,因而,猪呼吸道疾病的严重程度取决于蓝耳病的致病性。