Singel(1981)等发现,人红细胞与白细胞一样,也具有重要的免疫功能,其基础是红细胞表面的C3b受体。国内的郭峰等许多学者也发现了人红细胞上存在C3R,并建立了一系列检测方法。机体的免疫系统是由免疫细胞和免疫分子组成的一个完整的免疫网络,由于新生雏鸡免疫生理的特殊性,各种应激因素易使其潜伏感染转化为活动感染。因此,小鸡免疫功能的调节主要在于如何增强机体免疫性。目前,已有学者研究开发免疫调节剂或增强剂或提高机体免疫性以达到防病、治病的目的。微生态制剂是否对鸡免疫功能有影响是一个值得研讨的课题,本实验旨在讨论益生芽孢杆菌对鸡免疫器官和机体免疫系统的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
(1)1日龄雏鸡,黄羽×本地土鸡,购自雅安草坝某鸡场。
(2)益生芽孢杆菌制剂,由四川农业大学微生态工程实验室提供。
(3)新城疫LaSotaⅥ系弱毒苗,批号:9928,购自雅安市畜牧局。
1.2 分组及给药 将1日龄雏鸡随机分成试验组和对照组,均饲喂同一日粮,试验组日粮中添加0.1%益生芽孢杆菌制剂。日粮营养水平如下:1~3周龄:粗蛋白20.97%,代谢能2.93 Mcal/kg,Ca 0.94%,P 0.64%,有效P 0.48%,Lys 1.10%,Met 0.44%,CF 4.66%;4~7周龄:粗蛋白18.30%,代谢能2.97 Mcal/kg,Ca 0.88%,P 0.63%,有效P 0.46%,Lys 0.95%,Met 0.35%,CF 5.0%。
1.3 免疫 两组雏鸡均用鸡新城疫苗,按规定剂量滴鼻,7日龄首免,21日龄2免。
1.4 检测指标
(1)增重率:每周分别从试验组和对照组随机取4羽称重。
(2)E-C3bR花环率:从第2周将上述称重的鸡只,颈静脉或翅下采血3.0 ml,肝素钠抗凝,取抗凝血0.75 ml用生理盐水4 ml洗涤离心3次,再用生理盐水稀释成1.25×10.7个/ml的红细胞悬液;参照文献制备C3b致敏酵母悬液,取C3b致敏酵母悬液和鸡红细胞悬液各3滴,混匀,于37℃水浴45 min,取出轻轻摇匀,加1滴0.25%戊二醛固定5 min,再用适量生理盐水稀释,涂片,自然干燥,瑞氏染色,显微镜下检查,计数花环率。
(3)免疫器官重量:从1周龄开始,剖杀上述已称重(或采血)的鸡只,分离胸腺、脾脏、法氏襄,用滤纸吸去水分,称重。
1.5 统计方法 用t检验进行统计分析。
2 结果
益生芽孢杆菌对鸡增重效果明显,特别是第4周开始能显著促进雏鸡生长发育。
益生芽孢杆菌对雏鸡E-C3bR花环率影响只有第5周龄时差异显著,总平均差异不明显。说明其对鸡红细胞免疫影响不大。
益生芽孢杆菌制剂对雏鸡E-C3bR花环率的影响。
益生芽孢杆菌对免疫器官增重在第2周龄和第6周龄不显著,而其余周龄都表现出显著或极显著。表明益生芽孢杆菌能促进免疫器官的生长发育。
益生芽孢杆菌制剂对鸡胚免疫器官发育的影响。
3 讨论
3.1 益生芽孢杆菌对鸡增重效果明显,这可能是由于益生芽孢杆菌合成B族维生素、赖氨酸、蛋氨酸等营养物质为鸡所利用(姚建国,2000)。同时,益生芽孢杆菌可能产生了蛋白酶、淀粉酶、植酸酶等各种消化酶来促进饲料的转化。益生芽孢杆菌具有较强的酶活性,同时,其能增加血液中的钙、镁,减少钾量而改善矿物质的吸收。本次试验证明了益生芽孢杆菌能显著促进雏鸡生长发育。
3.2 从微生态学来讲,畜禽疾病是由于机体内菌群失衡所致,益生芽孢杆菌用于饲料中可恢复正常菌原有的平衡态,其可能的途径有:产生了挥发性脂肪酸,降低肠道pH值,从而抑制病原微生物的生长发育;防止肠道内产生的肠毒素、毒性胺、吲哚、甲烷等有毒物质的,有利于动物生长;刺激动物分泌过氧化氢、有机酸、类抗生素等杀菌物质,杀灭潜在的病原微生物,刺激动物产生非特异性免疫调节因子,提高免疫球蛋白浓度和巨噬细胞活性,从而增强机体免疫功能。
3.3 1983rh Inooka和Kimuxa首先阐述了纳豆芽孢杆菌饲喂鸡后,能够增强雏鸡对抗绵羊红细胞的凝集抗体产生,并认为饲喂纳豆芽孢杆菌在雏鸡免疫反应上起一个重要作用。1986年、1988年Inooka等用该菌饲喂雏鸡进行研究,结果实验组鸡脾脏T、B淋巴细胞比例显著升高且显著地降低脾脏的粘连细胞过氧化氢的产生。国内刘克林研究报道饲喂蜡样芽孢杆菌组的免疫器官生长发育较对照组迅速、成熟快,血中T细胞值较对照组高。潘康成等用地衣芽孢杆菌也能促进家兔细胞免疫和体液免疫。本试验也证明了益生芽孢杆菌难促进免疫器官的生长发育。
3.4 许多学者都已证实了益生芽孢杆菌能促进机体体液免疫和细胞免疫,但本次试验表明益生芽孢杆菌对鸡红细胞免疫影响不明显(P>0.05)。其实,影响其效果的因素较多,包括动物种类、年龄、生理状态、菌株组成及其定植能力、饲养方式与剂量等。另外,可能由于接种了鸡新城疫疫苗而形成的免疫复合物(IC)占据红细胞C3b受体空位,从而表现出较轻微代偿性红细胞免疫缺陷,从而间接降低了益生芽孢杆菌的作用。冯来坤等(1991)报道了鸡红细胞上存在C3b受体,本次试验进一步证实这一结果,也支持了Siegel关于RCIS至少广泛在哺乳动物存在的论断(Siegel,1981)。
目前,国内外还没有关于益生芽孢杆菌对鸡红细胞免疫影响研究的正式报道,本试验结果表明益生芽孢杆菌对鸡红细胞免疫的影响不明显。