雏鸡接种法分离病毒：取病鸡的病料腹腔接种于1周龄以内的易感雏鸡。在接种后2-10周进行检查，如肉眼或显微镜能发现马立克病变、细胞培养能分离出病毒、羽毛囊中出现特异性抗原、血清抗体试验呈阳性，则表明已经感染。
琼脂扩散试验：按常规制作琼脂板，梅花打孔器打孔。① 用标准抗原检测抗体（受检鸡血清）。用滴管将受检血清按顺序间隔地滴加于周边孔内，以孔满而不溢出为度。每加一份血清须换一支滴管向中心孔内滴加抗原，以满为度；再取一支滴管向空下的周边孔内加入标准阳性血清。将加样完毕的琼脂平皿加盖后，在室温下静止片刻，待样品稍稍扩散液面下陷后，平放于带盖的湿盒内，置37℃温箱中，于24小时内观察并记录结果。② 用标准阳性血清检测病毒抗原（受检鸡羽髓浸液）。选拔受检鸡含羽髓丰满的翅羽或身上其他部位大羽（幼鸡8根，中、成鸡3～根），将含有羽髓的羽根部分按编号分别剪下收集于小试管内，于每管内滴加蒸馏水2～3滴（羽髓丰满时也可不加），用玻璃棒将羽根挤压于试管底，使羽髓浸出液流至管口，另一人用滴管将其吸出。用同样方法浸提其他样品。将被检样品间隔滴加到周边孔内，每加一个样品须换一支滴管或将滴管充分洗净、拭干再用。用另一支吸管向中心孔滴加标准阳性血清。再用一支吸管向空下的周边孔滴加标准抗原。以上均以加满不溢为度。加样完毕的琼脂平皿加盖后，在室温下静止片刻，待样品稍稍扩散而液面下陷后，平放于带盖的湿盒内，置37摄氏度温箱中，于24小时内观察并记录结果。③ 判定结果。被检材料形成清晰的沉淀线并与标准试剂的沉淀线相互融合，则判为阳性反应；不出现沉淀线的则判为阴性反应；标准阳性血清和抗原所产生的沉淀线末端弯向被检样品孔，则该被检样品判为弱阳性；有的被检材料可能会产生一条以上沉淀线，仍发球阳性反应。
间接血凝试验：凝集价达1：16或更高时，即认为是抗体阳性反应。
