一、研究背景
仔猪白痢是由致病性大肠埃希氏菌所引起的一种仔猪常发病，多发生于10-30日龄仔猪，发病率高，死亡率低，严重影响仔猪的生长发育。若治疗时间不及时或治疗方法不妥当，则极易形成僵猪，从而降低饲料报酬，影响养猪的经济效益。该病在世界各地均有发生，据统计美国仔猪黄白痢的发病率约为16.5%，死亡率可达15.5%；荷兰仔猪黄、白痢的发病率约为16.6%，死亡率为11.5-14.2%；我国华东西区部分规模化猪场，仔猪黄白痢平均发病率约为29.0%±3.0%，平均死亡率达到20.4%±1.9%。随着规模化养殖的发展，由大肠杆菌引起的仔猪腹泻有明显上升趋势，仔猪死亡率增高，成活率降低，断奶窝重降低，生长发育受阻，严重制约了养猪业的健康发展。
由于兽医临床上药物的不合理使用，引起动物源性病原菌耐药现象异常严重，导致病原菌的不断传播扩散，给养殖业带来严重的经济损失。此外，耐药菌在动物、环境和人类之间广泛的传递和扩散可能成为严重危害人类健康的因素之一。
鉴于此种情况，蔚蓝生物股份有限公司开发出了中药治疗仔猪白痢的药物——连翁颗粒，并且在农业部成功注册三类新兽药，证书号：[（2013）新兽药证字2号]。
二、新兽药名称及主要成分
通用名：连翁颗粒。
主要成分：黄连、白头翁、老鹳草、大黄炭。
三、产品特点
鉴于细菌耐药性不断增强、仔猪白痢给养猪业带来较大的危害和治疗相对困难，给人类健康带来巨大威胁的现状，因此研究开发安全、有效、不易产生耐药性的新型药物显得越来越重要。
为此，蔚蓝生物股份有限公司根据民间中兽医工作者多年的临床实践经验和研究结果选定黄连、白头翁、老鹳草和大黄炭4味中药，对其配方和生产工艺进行系统研究而得的专门用于治疗仔猪白痢的中药复方颗粒——连翁颗粒。经大量的研究表明，本品具有较高的安全性，其生产工艺稳定可行，质量可控，剂型设计合理，对大肠杆菌感染引起的仔猪白痢有较好的治疗效果，给药方便。
连翁止痢颗粒在靶动物仔猪的安全性。结果证明，连翁止痢颗粒按2g/kg/d和1g/kg/d的剂量连续给药5d，观察10d，试验仔猪采食、饮水、排便均未见异常和毒副作用，两个给药组与空白对照组的日均增重无明显差异，各组扑杀2头仔猪，经剖检胃、肠、心、肝、脾、肾等脏器均未见病理变化，具有较高的安全性。
四、药效学研究
蔚蓝生物股份有限公司对连翁颗粒的主要药效学作用进行了研究。观察连翁颗粒对正常小鼠以结晶硫酸钠、蓖麻油致泻和小肠推进运动试验观察其止泻作用，以二甲苯致小鼠耳廓水肿、甲醛和蛋清致大鼠足趾肿胀试验，观察其抗炎效果，用醋酸致小鼠扭体法观察其止痛效果，采用平板打孔法和MIC测定法观察其对大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌效果。结果显示，连翁止痢颗粒对结晶硫酸钠、蓖麻油导致的小鼠腹泻有一定的止泻作用，能抑制肠蠕动，减少醋酸致小鼠扭体次数，抑制二甲苯致小鼠耳廓水肿和甲醛、蛋清致大鼠足趾肿胀，对大肠杆菌和沙门氏菌有一定的体外抑菌效果。
结论：连翁颗粒具有止泻、抗炎、抗菌和止痛作用。
表1连翁颗粒粒对结晶硫酸钠致小鼠腹泻的止泻结果
组 别 | 动物数（只） | 剂量（g/kg b.w.） | 腹泻次数（次/只） | |||
0-1h | 1-2h | 2-3h | 3-4h | |||
LWS-H | 10 | 2.6 | 1.3±1.5 | 1.5±0.6 | 0.8±0.5 | 0.3±0.2 |
LWS-M | 10 | 1.3 | 1.0±0.9 | 0.8±0.5 | 0.7±0.4 | 0.2±0.4 |
LWS-L | 10 | 0.65 | 1.2±1.0 | 1.2±0.7 | 1.2±1.1 | 0.5±0.2 |
XBJ | 10 | 0.72 | 2.0±1.3 | 2.4±1.2 | 1.4±0.8 | 0.3±0.5 |
MX | 10 | 等容积生理盐水 | 1.8±1.0 | 2.5±1.3 | 1.3±0.7 | 0.4±0.5 |
注：LWS-H 代表连翁颗粒高剂量组，LWS-M 代表连翁颗粒中剂量组，LWS-L代表连翁颗粒低剂量组，XBJ代表盐酸小檗碱组，MX代表
模型组；*表示与模型组相比差异显著（p<0.05），*表示与模型组相比差异极显著（p<0.01），下同。
表2连翁颗粒对蓖麻油致小鼠腹泻的止泻结果
组 别 | 动物数（只） | 剂量（g/kg b.w.） | 腹泻次数（次/只） | |||
0-1h | 1-2h | 2-3h | 3-4h | |||
LWS-H | 10 | 2.6 | 2.4±1.1 | 2.1±1.0 | 0.6±0.5 | 0.3±0.7 |
LWS-M | 10 | 1.3 | 1.2±0.5 | 1.6±1.4 | 0.7±0.5 | 0.4±0.5 |
LWS-L | 10 | 0.65 | 2.0±1.0 | 3.3±0.7 | 1.7±0.8 | 0.8±0.8 |
XBJ | 10 | 0.72 | 1.1±1.0 | 3.3±1.8 | 1.3±0.9 | 0.5±0.7 |
MX | 10 | 等容积生理盐水 | 3.1±1.1 | 4.3±1.4 | 1.7±0.7 | 1.2±0.9 |
表3连翁颗粒对小鼠小肠推进运动影响的结果
组 别 | 动物数（只） | 剂量（g/kg b.w.） | 小肠总长度（cm） | 炭墨推进距离（cm） | 炭墨推进率（cm） |
LWS-H | 10 | 2.6 | 46.7±2.5 | 30.1±3.7 | 64.5±5.1 |
LWS-M | 10 | 1.3 | 50.7±3.3 | 33.2±4.0 | 65.5±10.0 |
LWS-L | 10 | 0.65 | 50.7±3.8 | 32.2±5.1 | 63.5±11.0 |
XBJ | 10 | 0.72 | 50.0±3.5 | 27.6±4.0 | 55.5±10.0 |
MX | 10 | 等容积生理盐水 | 50.7±4.0 | 41.3±5.6 | 82.4±16.0 |
表4 连翁颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 `x ±S n=10
组 别 | 动物数(只) | 剂量(g/kg b.w.) | 肿胀度（mg） |
LWS-H | 10 | 2.6 | 16.51±5.22* |
LWS-M | 10 | 1.3 | 17.25±3.15* |
LWS-L | 10 | 0.65 | 18.84±3.99 |
XBJ | 10 | 0.72 | 22.88±3.16 |
MX | 10 | 等容积生理盐水 | 23.16±3.56 |
表5连翁颗粒对甲醛致大鼠足趾肿胀的影响（x±SD,n=6）
组 别 | 试验动物数（只） | 剂量（g/kg） | 甲醛致炎不同时间足肿胀率（%） | |||
0.5h | 1h | 2h | 4h | |||
LWS-H | 6 | 2.6 | 51.7±2.6* | 53.8±6.2* | 56.4±3.7* | 31.7±5.9* |
LWS-M | 6 | 1.3 | 60.2±10.2 | 44.7±4.9* | 55.0±4.8 | 37.8±4.2* |
LWS-L | 6 | 0.65 | 53.4±9.5* | 75.6±7.5 | 55.6±4.7* | 38.5±3.2 |
XBJ | 6 | 0.72 | 62.6±14.1 | 61.3±6.3 | 66.0±9.0 | 47.9±9.9 |
MX | 6 | 等容积生理盐水 | 71.3±6.6 | 69.9±7.9 | 69.4±13.7 | 50.4±7.5 |
表6 连翁颗粒对蛋清致大鼠足趾肿胀的影响（x±SD,n=6）
组 别 | 试验动物数（只） | 剂量（g/kg） | 蛋清致炎不同时间足肿胀率（%） | |||
0.5h | 1h | 2h | 4h | |||
LWS-H | 6 | 2.6 | 105.0±5.9 | 83.4±3.6 | 69.5±11.0* | 29.5±35.7* |
LWS-M | 6 | 1.3 | 111.3±6.2 | 75.6±3.8 | 50.7±9.6* | 36.8±1.4* |
LWS-L | 6 | 0.65 | 97.6±18.5 | 107.4±10.7 | 67.4±8.2* | 50.5±3.6* |
XBJ | 6 | 0.72 | 101.4±16.2 | 116.8±24.2 | 90.2±9.8 | 58.8±8.5 |
MX | 6 | 等容积生理盐水 | 103.5±22.3 | 92.7±9.0 | 90.2±6.0 | 62.6±1.8 |
表7 连翁颗粒对小鼠试验性致痛的影响 `x ±S n=10
组 别 | 试验动物数（只） | 剂量（g/kg） | 扭体次数 |
LWS-H | 10 | 2.6 | 12.34±2.6* |
LWS-M | 10 | 1.3 | 13.88±3.4* |
LWS-L | 10 | 0.65 | 13.54±1.8* |
XBJ | 10 | 0.72 | 17.27±2.6 |
MX | 10 | 2.6 | 18.31±4.8 |
表8 中药及其复方对大肠杆菌的抑菌结果
药 物 | 浓度（g/ml） | 抑菌圈直径（mm） | MIC值（mg/ml） | ||||
1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | ||
黄 连 | 1.0 | 8 | 9 | 8 | 200 | 175 | 150 |
白头翁 | 1.0 | 7 | 7 | 8 | 200 | 250 | 200 |
老鹳草 | 1.0 | — | — | — | — | — | — |
大黄炭 | 1.0 | — | — | — | — | — | — |
黄连：白头翁（1:1） | 1.0 | 9 | 8 | 10 | 175 | 200 | 175 |
连翁颗粒 | 1.0 | 8 | 11 | 10 | 150 | 150 | 175 |
注：“-”表示无明显抑菌作用。抑菌圈判断标准：直径>10 mm为强抑菌， 8-10 mm为抑菌， 8 mm以下为不完全抑菌。表13同。
表9 中药及其复方对沙门氏菌的抑菌结果
药 物 | 浓度（g/ml） | 抑菌圈直径（mm） | MIC值（mg/ml） | ||||
1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | ||
黄 连 | 1.0 | 11 | 10 | 10 | 200 | 200 | 200 |
白头翁 | 1.0 | 10 | 9 | 9 | 200 | 200 | 200 |
老鹳草 | 1.0 | 10 | 12 | 9 | 200 | 150 | 150 |
大黄炭 | 1.0 | — | — | — | — | — | — |
黄连：白头翁（1:1） | 1.0 | 11 | 9 | 12 | 200 | 175 | 200 |
黄连：白头翁：老鹳草（3:3:2） | 1.0 | 10 | 11 | 12 | 175 | 150 | 125 |
连翁颗粒 | 1.0 | 10 | 11 | 9 | 150 | 200 | 175 |
五、临床应用
1.适应症
主要用于治疗大肠杆菌及其他致病菌引起的仔猪黄白痢、仔猪断奶后腹泻、猪回肠炎及各类久治不愈的顽固性腹泻。
2.用法用量
预防断奶仔猪腹泻：本品0.5kg拌料50kg，连用五天，可有效预防断奶仔猪腹泻。
治疗哺乳仔猪腹泻：每窝哺乳仔猪一包50g，溶于25ml，25-45摄氏度温水调制成稀糊状，灌服，一天两次，连用三天。
3.临床疗效试验
阜新市洪亮养殖场，经产母猪存栏300头。3月份发生哺乳仔猪腹泻，以水样腹泻居多，仔猪严重脱水，极度消瘦。虽经抗生素治疗，但效果不理想。10日龄前哺乳仔猪死亡近半；10日龄至断奶期间哺乳仔猪，死亡率虽低，但仔猪消瘦，断奶重过低。公司了解情况后，推荐猪场使用连翁颗粒。
4.操作方法
将本品一包50g，溶于25-45摄氏度温水30ml，调制成稀糊状，用注射器灌服患病仔猪10-15头。上下午各一次，连用三天。
5.治疗效果的对比
一般经过3天治疗后，仔猪腹泻得到完全控制，绝大部分仔猪采食及粪便状况恢复至正常。治疗后仔猪长势良好，无僵猪现象出现。
针对10日龄仔猪腹泻，临床治疗对比表明，连翁颗粒治疗效果明显，恢复后增重效果好。
发病仔猪头数 | 发病日龄 | 治疗方案 | 治愈率 | 仔猪状态 | 断奶重 |
40 | 5-10日龄 | 庆大、环丙沙星肌肉注射 | 55% | 部分消瘦 | 28天断奶平均6.5kg |
50 | 5-10日龄 | 连翁颗粒灌服 | 90% | 完全康复 | 28天断奶平均8kg |
六、小结
连翁止痢颗粒为纯中药制剂，绿色、无残留、较少产生耐药性，甚至有报道称中药制剂可逆转耐药性。连翁颗粒中含有多种生物碱，鞣质、黄酮、有机酸、挥发油、大黄多糖和三萜皂苷。经过大量临床验证，其对大肠杆菌及其他致病菌引起的仔猪细菌性腹泻有奇效，对病毒性腹泻继发感染效果明显。目前连翁颗粒已经获得国家三类新兽药证书1项，申报国家发明专利2项，均已进入实质审查阶段。连翁颗粒为全国首创，在治疗大肠杆菌感染引起的仔猪白痢有较好的治疗效果。与其他药物相比具有安全、无耐药性、无残留等的显著优点。
