摘要： 本实验对以山茶叶、黄芪等组成的复方进行了抗病毒效果评价与药理作用研究及临床治疗试验。结果表明由山茶叶组成复方对NDV的灭活率和抑制率分别为59.19%、67.5%，抗病毒效果明显优于单方的山茶叶和药物对照黄连，对NDV 50%(IC-50)抑制浓度为1∶610.5，提示有较强抗病毒作用。
关键词: 山茶叶；黄芪；
鸡新城疫是对养鸡业造成严重危害的病毒病，疫苗免疫尚不完善，抗病毒化学药物对本病无效，至今尚无有效治疗药物，这使得人们把研究方向投向中草药，目前对中草药治疗鸡新城疫的研究报道很少，民间零星报道也只是停留在临床治疗水平上，尚需要做深入细致的研究。
笔者对中草药资源进行调查过程中，收集了民间治疗鸡新城疫病毒的验方。在此基础上制备了由山茶叶组成的复方制剂，并对其进行了抗鸡新城疫效果观察，初步证明有效。现将结果报告如下。
材料与方法
1.1 药物中药复方由山茶叶、黄芪、金银花、板蓝根等组成；山茶叶采自吉林省通化地区，黄连为阳性对照药，购自长春中医医院。以上各药用水煮醇沉法提取，每毫升相当于1 g生药；提取物用细胞维持液作适当稀释，经混和纤维素微孔滤膜(孔径25 μm)滤过。
1.2 病毒鸡新城疫病毒〔NDV ND-IV(usoto)〕，购自中国兽药监察所。成纤维细胞(CEFC)原代培养，用于培养NDV病毒；犬细小病毒(CPV)购自中国兽药监察所，猫胎肾传代细胞(F81)由中国人民解放军军需大学军事兽医研究所惠赠，用于培养CPV，传代时用含10%小牛血清的MEM营养液，维持液易以含2%小牛血清的MEM营养液。
1.3 复方、黄连、山茶叶对鸡胚、CEFC、F81的最大无毒浓度的测定取复方、黄连、山茶叶3种实验药液的50、100、200、300、400、500倍稀释液，用多个稀释度接种10个10日龄的鸡胚 (0.1 ml/胚)，同时设生理盐水对照和病毒对照，24 h内死亡鸡胚弃掉，24 h后死亡鸡胚及时取出冷冻，活鸡胚继续孵化直至出雏，测定3种提取物对鸡胚的最大无毒浓度。在微量板每孔加入2滴每毫升含1百万细胞营养液(每滴25 μl)，然后分别在第一孔加入1∶20稀释的所测液2滴，混匀后加入第2孔，如此梯度稀释到640倍(用透明胶密封后置37 ℃)培养48 h。与正常细胞孔对照，选择细胞形态良好并能在良好单层的药物最大浓度作为该药对细胞的无毒浓度，供试验用。
1.4病毒滴定按常规方法在F81上测定CPV的半数感染量(TCID-50)。
1.5细胞病变抑制实验在长成单层细胞的96孔细胞培养板上分别感染100个TCID-50的NDV，加不同稀释的可耐受药液观察CPE，计算抑制指数(IC-50)。
1.6 复方、黄连、山茶叶对NDV灭活作用黄连为阳性药物对照，山茶叶为单方对照，并设立生理盐水和病毒对照，计算病毒滴度及病毒灭活率。
1.7复方、黄连、山茶叶在CEFC上对NDV增殖的影响黄连为阳性药物对照，山茶叶为单方对照，并设立生理盐水和病毒对照，测定实验组与对照组的TCID-50，计算抑制指数和抑制率。
1.8复方、黄连、山茶叶对CPV的作用取复方、黄连、山茶叶的20、40、 80、 160、320、640倍稀释液，同步加入96孔细胞培养板中5%CO2环境中培养(37 ℃)72 h，测定其在F81上对CPV增殖的影响，黄连为阳性药物对照，山茶叶为单方对照，并设立生理盐水和病毒对照，测定实验组与对照组的TCID-50，计算抑制指数和抑制率。
2结果
2.1 复方、黄连、山茶叶对鸡胚、CEFC、F81最大无毒浓度山茶叶、复方、黄连对鸡胚最大无毒浓度(以稀释倍数表示，下同)均为100倍；对CEFC、F81的最大无毒浓度均为20倍。
2.2病毒滴定CPV在F81上的TCID-50为7.0700。
2.3细胞病变抑制实验复方对NDV的IC-50为1∶610.5。
2.4 复方、黄连、山茶叶对NDV灭活作用结果表明，复方药液对NDV抑制作用明显优于黄连和山茶叶，其最大灭活率分别为59.19%、53.06%、57.14%，并呈现良好的量效关系。
2.5 复方、黄连、山茶叶在CEFC上对NDV增殖的影响3种药物在CEFC上对NDV最大抑制率分别为67.5%、59.70%、58.59%，复方＞山茶叶＞黄连，并呈现良好的量效关系。结果见表2、图2。
2.6 复方、黄连、山茶叶对CPV的作用复方药液在F81上对CPV的增殖有明显的抑制作用，并存在量效关系。
3 讨论
3.1 本复方是在验方“畜疫安”的基础上以山茶叶为主药组成的。主要成分有：黄芪、金银花、板蓝根等；金银花有较强的抗菌作用，板蓝根具有显著的免疫增强效果，可使外周血白细胞数及淋巴细胞数显著增多，促进网状内皮细胞的吞噬能力，增强本复方的抗病毒效果。
3.2本实验对以山茶叶、黄芪、金银花、板蓝根等组成的复方进行了抗病毒效果评价，复方对NDV的IC-50为1∶610.5。复方、黄连、山茶叶对NDV最大灭活率分别为59.19%、53.06%、57.14%；复方、山茶叶、黄连在CEFC对NDV最大抑制率为67.5%、59.70%、58.59%，复方在CEFC对与囊膜病毒NDV、在F81对囊膜病毒CPV均有明显的抑制作用，其抗病毒效果优于山茶叶和黄连。复方对NDV、CPV两种病毒均有抑杀作用，且呈良好的量效关系。
3.3本复方对NDV的最大灭活率为59.19%，最大抑制率为67.5%，同已报道的抗病毒中草药相比，有较高的灭活率与抑制率，在临床治疗试验中，我们采用连续给药以维持稳定的血药浓度，确保疗效。同时将通过对其有效成分的进一步研究，以增强其治疗效果。
3.4由于本复方毒性较低、能增强机体免疫力、有较好的抗菌效果，故采用本复方治疗鸡新城疫疾病，即可预防由于感染鸡新城疫病毒引起的并发症，又可避免药物残留、污染环境。