目的：应用高效液相色谱法对耳聋左慈丸中的丹皮酚进行含量测定。方法：选用RP C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，甲醇-水-乙酸(65∶30∶5)为流动相，检测波长为274 nm，流速为0.8 mL.min-1。结果：线性范围为0.052～0.624 μg(r=0.999 9),平均回收率为98.72%，RSD为1.8%。结论：本法简便、灵敏、准确。
关键词 高效液相色谱法 耳聋左慈丸 丹皮酚
耳聋左慈丸在中国药典(1995年版)中仅有丹皮酚的定性鉴别方法，无含量测定内容［1］。文献显示，对该药有用气相色谱法进行含量测定的报道［2］。笔者应用高效液相色谱法对该药中的丹皮酚进行了含量测定。实验结果表明：本方法简便、灵敏度高、重复性好，可作为该药的质量控制方法之一。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：美国SP-8800泵，SP-8450紫外-可见光检测器，日本岛津C-R6A数据处理机；丹皮酚对照品：中国药品生物制品检定所；耳聋左慈丸：武汉健民制药厂；甲醇：色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱：RP C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，预柱RP C18(50 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相：甲醇-水-乙酸(65∶30∶5)。流速：0.8 mL.min-1。柱温：室温。检测波长：274 nm。灵敏度：0.1 AUFS。衰减：3。理论塔板数：用丹皮酚峰计算不少于2 500。
3 测定方法与结果
3.1 选择性试验 按处方比例及生产制备方法，制备不含牡丹皮的阴性样品，按照样品测定项下供试品溶液制备法制备阴性对照溶液，吸取10 μL进样，另取丹皮酚对照品溶液10 μL进样，结果表明，对照品峰与阴性对照溶液峰没有重叠。见图1-A、B。
图1 丹皮酚对照品溶液(A)、阴性对照溶液(B)、
供试品溶液(C)的图谱
1，2.未知成分 3.丹皮酚
3.2 线性关系 精密称取丹皮酚对照品约5 mg置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，再分别吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，各进样10 μL，照上述色谱条件测定峰面积，以进样量(μg)对峰面积积分值进行线性回归，得回归方程为：
A=359 896.0 W+15.2 r=0.999 9
线性范围0.052～0.624 μg。
3.3 进样精密度试验 取1份样品，同样品测定项下方法操作，连续进样5次，分别测定峰面积，RSD=0.46%。
3.4 重复性试验 按照样品含量测定条件，对同一批耳聋左慈丸进行含量测定，计算丹皮酚的百分含量为0.088%(n=5)，RSD=1.9%。
3.5 回收率试验
3.5.1 空白回收率试验 称取不加牡丹皮的耳聋左慈丸(小蜜丸)原配方细粉0.4 g，置50 mL容量瓶中，加入5.0 mg.mL-1丹皮酚的甲醇溶液0.5 mL，按照样品含量测定方法操作，测定丹皮酚峰面积。平均回收率为99.12%(n=5),RSD=1.3%。
3.5.2 加样回收率试验 精密称取5份已混匀且已知丹皮酚含量的耳聋左慈丸细粉0.4 g，置50 mL容量瓶中，各加入5.0 mg.mL-1丹皮酚的甲醇溶液0.5 mL，按照样品含量测定方法操作，测定丹皮酚峰面积。平均回收率为98.72%(n=5)，RSD=1.81%。
3.6 样品含量测定试验
3.6.1 供试品溶液的制备 取耳聋左慈丸(小蜜丸)成品适量，研碎，过4号筛，混匀，精密称取细粉约0.4 g，置50 mL容量瓶中，加入水3 mL，浸润10 min后，加入乙醚30 mL，置超声波清洗器中超声提取20 min,小心倾出乙醚液，过滤于250 mL蒸馏烧瓶中，再同法提取4遍，合并乙醚液，置旋转薄膜蒸发器内于低温、真空条件下旋转薄膜蒸发至干，残留物用甲醇溶解，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.6.2 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品约5 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取2.0 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.6.3 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定，以外标法计算样品中丹皮酚的含量，结果见表1。
4 讨论
由于蜂蜜难溶于极性较小的溶剂，因此，在本文样品提取方法中加入少量水，其目的是为了使样品分散均匀，有利于丹皮酚的提取。操作时动作要轻，以免被水湿润的样品粉末大面积粘附于瓶壁上。
