目的：应用高效液相色谱法对结肠安灌肠剂中芍药苷进行含量测定。方法：选用Hypersil ODS-2分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(13∶87)为流动相，检测波长为230 nm，流速1.0 mL.min-1。结果：线性范围为1.12～6.72 μg(r=0.999 99)，平均回收率为97.63%，RSD为0.85%。结论：本法简便、灵敏、准确。
关键词 高效液相色谱法 结肠安灌肠剂 芍药苷
结肠安灌肠剂由赤芍、青黛、儿茶、白芨等组成，具有清热解毒、收湿止泻、活血止血、祛腐生肌的功用，用于溃疡性及慢性结肠炎的治疗。我们采用高效液相色谱法对方中赤芍所含芍药苷进行含量测定，并进行了方法学考察，为该方建立了质量控制标准。
1 仪器与试药
Waters 590、740数据处理仪、U6K进样器,Hitachi紫外检测器。
乙腈为色谱用试剂，磷酸二氢钾为分析纯。
芍药苷对照品(购自中国药品生物制品检定所)。
2 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Hypersil ODS-2 5 μm 大连化学物理研究所)250 mm×4.6 mm;流动相：乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(13∶87)；检测波长：230 nm；柱温：室温；流速：1.0 mL.min-1；最小检测限：27.3 ng；理论塔板数：8 000。在此条件下，芍药苷与其它组分达到基线分离(见图1)。
图1 芍药苷对照品(a)、供试品(b)和阴性对照(c)色谱图
1.芍药苷
3 实验方法
3.1 选择性试验 按处方比例及样品制备方法，制备不含赤芍药材的阴性样品，按照样品测定项下的方法进行测定，结果(见图1)表明无阴性干扰。
3.2 线性关系考察 精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25，30 μL依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，芍药苷量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y=40.92X+3.78 r=0.999 99
芍药苷在1.12～6.72 μg之间呈良好的线性。
3.3 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，测定芍药苷面积，RSD=0.94%。
3.4 重现性试验 按照含量测定的方法，对同一样品测定6次，计算芍药苷含量为2.25 mg.g-1，RSD=1.4%。
3.5 加样回收率试验 取已知含量的样品，分别精密加入芍药苷对照品溶液适量，按照样品测定项下制备供试品溶液，按上述色谱条件测定芍药苷峰面积。平均回收率为97.63%(n=6)，RSD=0.85%。
4 样品测定
4.1 供试品溶液的制备 取本品约5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加适量乙醇充分搅拌，使之充分分散后，超声波处理10 min，取出，加乙醇稀释至刻度，摇匀，静置0.5 h。精密吸取上清液5 mL置蒸发皿中，水浴蒸干，精密加水5 mL溶解残渣，并一起移至5 mL具塞试管中，超声处理10 min,4 000 r.min-1离心10 min,精密吸取上清液2 mL加于聚酰胺柱(100～200目，1 g干法装柱，10 mm)，用水进行洗脱，准确收集洗脱液10 mL，作为供试品溶液。
4.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品1 mg，置5 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
4.3 测定法 分别精密吸取对照品溶液5～30 μL与供试品溶液50 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，外标法计算，即得。结果见表1。
表1 样品中芍药苷含量测定结果(n=2)
样品批号
芍药苷含量/mg.g-1
990709
2.85
990710
3.05
990802
2.25
990804
1.78
990805
1.69
5 讨论
5.1 中药复方制剂以芍药苷含量为测定指标的文献报道很多［1～4］，因而本制剂也进行芍药苷含量测定，方法简便、灵敏、选择性好，阴性无干扰。
5.2 本制剂是一种粘稠的能较好附着于肠壁的制剂，我们曾试图采用正丁醇、氯仿等制剂振摇提取，破坏其粘稠性，结果均告失败，而乙醇却能较好地破坏其粘稠性，使提取液澄清，故我们选用了乙醇作为提取溶剂，超声波作为提取方式，对提取时间进行了10，20，30 min的比较试验，芍药苷含量测定结果分别是2.27，2.23，2.26 mg.g-1，故选用了超声处理10 min。另因本方中的其余药材含有大量的鞣质类成分，干扰HPLC分离，我们采用了聚酰胺小柱对其进行纯化处理，使大量鞣质成分被吸附，而芍药苷吸附较弱，易被水洗脱，使HPLC图谱分离良好(见图1)。
5.3 由方法学考察结果可见，本法精密度高，重现性及线性关系好，回收率满意，故认为本法简便、灵敏、准确，是可行的。本法的建立为本制剂提供了质量标准，亦可为同类中成药的质量控制提供参考。