目的：建立高效液相色谱法测定海福胶囊中吡啶酸铬的含量。方法：以甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾(15∶85)为流动相，于265 nm波长处以外标法测定。结果：线性范围1～10 μg·mL-1。在此范围内，浓度与峰面积线性关系良好(r=0.999 5)。吡啶酸铬的平均回收率为99.1%，RSD为0.22%(n=5)。结论：本法灵敏、准确、快速、简便。
关键词 高效液相色谱法 吡啶酸铬
海福胶囊内含螺旋藻与微量吡啶酸铬(C18H12N3O6Cr)。吡啶酸铬为三价有机铬，易为人体吸收，可提高糖尿病患者胰岛素的活性，海福胶囊作为糖尿病的辅助治疗药物，临床应用疗效显著。但是铬既是人体必需的微量元素，同时也是一种有害元素，过量或缺乏都会危及健康［1］。本文首次建立了反相高效液相色谱法测定制剂中微量吡啶酸铬的含量，该方法简便、灵敏、快速、准确。
1 仪器与试药
日本岛津公司LC-6A高效液相色谱仪。
海福胶囊：海军青岛制剂中心提供(每粒0.2 g，含吡啶酸铬0.32 mg)，吡啶酸铬对照品：分析纯，山东鲁胜生物工程公司提供。甲醇：HPLC纯，水：重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 色谱条件
大连依利特公司YWG色谱柱(4.6 mm×200 mm)，C18保护柱(4.6 mm×25mm)检测波长：265 nm，柱温：25 ℃，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.72 g，加水溶解至1 000 mL)(15∶85),流速：1.0 mL·min-1，灵敏度：0.08 AUFS,进样量：20 μL，纸速，1.0 cm·min-1。
3 方法和结果
3.1 线性关系试验 精确配制每1 mL含吡啶酸铬对照品1，2，4，6，8，10 μg的甲醇溶液，精密吸取20 μL，依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，求得峰面积积分值与进样浓度的回归方程为：
Y=30 692 X-4 531 r=0.999 5
吡啶酸铬浓度在1～10 μg·mL-1范围内的线性关系良好。
3.2 加样回收实验 取已测的海福胶囊样品(980730)内容物适量(约0.15 g)精密称定，精密加入对照品溶液适量，按“样品测定”项下方法操作，计算回收率结果见表1。
表1 回收率实验结果(n=3)
加入量/μg
测得量/μg
回收率/%
RSD/%
2.0
1.874
93.7
1.30
6.0
6.048
100.8
0.036
10.0
10.29
102.9
0.60
3.3 精密度试验 精密吸取供试品溶液20 μL，重复进样5次，其峰面积积分值的RSD为1.73%；另取供试品溶液20 μL，连续进样3日(每日3次)，日间峰面积积分值的RSD为0.55%。
3.4 重现性试验 按“样品测定”项下方法处理同一批样品5份，依法测定，其平均含量的RSD为0.61%。
3.5 添加剂干扰试验 取不含吡啶酸铬的海福胶囊的其它成分约0.15 g，精密称定，按“样品测定”项下操作，记录色谱图，结果证明添加剂不干扰测定。见图1。
图1 色谱图
A.对照品 B.样品 C.添加剂
1.吡啶酸铬(8.4 min)
3.6 样品的测定 取海福胶囊装量差异检查项下的内容物，混合均匀，取约0.15 g精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超声振荡30 min、放冷，加甲醇至刻度，摇匀后滤过，取滤液进样，测定结果见表2。
表2 含量测定结果
批号
测定次数
标示量%
含量/mg·g-1
RSD/%
980601
3
81.89
1.309
2.29
980730
6
88.44
1.415
0.90
980920
3
91.11
1.458
0.36
4 讨论
4.1 经分光光度计扫描，吡啶酸铬于218 nm和265 nm处均有吸收峰，218 nm干扰峰较多，故选择265 nm为检测波长。
4.2 比较了多种流动相系统(甲醇-磷酸盐缓冲液，甲醇-水，甲醇-乙腈-水，甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液等)，其中以甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液最好，流动相配比又以甲醇-磷酸盐缓冲液(15∶85)为好，在上述色谱条件下吡啶酸铬峰形好，不拖尾，tR=8.4 min，与添加剂中tR=6.2 min的杂质峰可达基线分离。在取样量适当，样品中含吡啶酸铬低于6 μg·mL-1时，该杂质浓度低，不出峰。
4.3 本制剂仅含微量吡啶酸铬，而吡啶酸铬仅含12.43%的三价铬。微量铬多用原子分光光度法测定［2］，本文首次建立HPLC测定微克级低浓度吡啶酸铬含量的方法，该方法灵敏、准确、快速、简便。