国家三类新兽药——猪支原体肺炎（RM48株）活疫苗

一、研发背景

1．立项目的及意义

猪支原体肺炎又称喘气病或猪地方性流行性肺炎，是由猪肺炎支原体引起的一种接触性慢性呼吸道传染病，临床上以咳嗽、气喘和肺部典型的“虾肉”样病变为特征，猪支原体肺炎普遍存在于世界各地，具有高发病率和低死亡率的特点，是造成我国养猪业经济损失重要的疾病之一。不同年龄、性别、品种的猪均能感染，根据初步统计，该病阳性感染率大概为70%-90%，发病率至少40%以上。患猪生长不良，饲料转化率降低13.8%，生产率下降15.9%，极大增加养猪成本，使经济收入下降，估计我国每年由此病损失可达100亿元以上。该病病死率虽不高，但其引发的继发性感染可出现严重死亡，造成的经济损失巨大。规模化猪场中猪肺炎支原体常和数种细菌、病毒等病原协同作用，而引起猪呼吸道疾病综合征，严重制约着养猪业的发展。

猪气喘病感染严重，使用抗生素预防和治疗成本高，易复发，且有药物残留，影响肉品质量。疫苗免疫接种是控制猪气喘病的有效措施。目前国内使用主要是国外进口的灭活疫苗，抗体产生比较慢，并且价格非常昂贵，难以满足市场需求。国内生产的猪支原体肺炎疫苗，有稳定的安全性和良好的免疫效果，但是免疫方式相对单一，需要胸腔注射，操作比较难，不利于疫苗推广使用。

2．研发历程

疫苗的研发虽然上世纪60年代就开始了，但是直到90年代才开始出现希望，虽然中国兽医监察所将猪肺炎支原体强毒株在乳兔体内连续传代700多代，使其减毒，培育出一株毒力低、免疫原性良好的猪肺炎支原体兔化弱毒株，但是，由于该菌株长期在乳兔体内传代，几乎失去了在培养基上生长的能力，无法适应工厂化条件下规模化疫苗生产。研发人员从1998年开始开展了培养基疫苗的研究。通过使用不同的培养基和不同的分离培养方法，经过在培养基反复多次诱导传代，使该菌株逐渐适应了培养基生长。2000年正式列为国家科技攻关课题进行研究。经过培养基连续传代，活菌滴度逐渐提高，40代以后，疫苗株在培养基中活菌滴度达到109颜色变化单位，符合疫苗制造的要求。2008年8月获得国家发明专利【专利号zl200610152519.7】。该菌株经过一系列鉴定符合猪肺炎支原体的各项特征，用本疫苗动物反传5代，毒力不返强； 超剂量接种观察25天，既无临床不良反应，也无肺脏病理变化；免疫后4个月保护率均达90%以上，在河南、北京等地10多万头猪临床应用效果良好。至此，完成了全部研究工作，中国兽医监察所、齐鲁动物保健品有限公司等研发单位完成了新兽药注册中的复核试验，在2014年4月终于获得农业部审批，拿到具有自主知识产权的国家三类新兽药证书，证书号为【（2014）新兽药证字14号】。

二、新兽药名称及主要成分

通用名：猪支原体肺炎（RM48株）活疫苗

主要成分：每头份疫苗中活菌数≥5×107.0CCU

三、疫苗特点

1．高效

流行株致弱，针对性强

猪肺炎支原体RM48株是我国自行采集、分离的流行强毒株经过乳兔连续传代790代致弱的猪肺炎支原体兔化弱毒株，菌株适应培养基生长，并进一步适应细胞，提高活菌滴度。中国发明专利菌种，专利号ZL 200610152519.7。

抗原含量高，免疫效果确实

每头份疫苗中活菌数≥5×107.0CCU，可诱导机体产生良好的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫，免疫效果确实，疫苗对不同强毒菌株的交叉保护效果好。

免疫效力测定

胸腔注射免疫效力测定（3批疫苗）结果见表1，20头50日龄健康仔猪，3组免疫，1组对照，45天攻毒，30日观察肺脏病变，肺脏保护率：78.5%，77.8%，78.9%，而鸡胚卵黄囊疫苗免疫保护率为68.3%。

表1 胸腔接种免疫效力测定

鼻腔注射免疫效力测定（3批疫苗）结果见表2，20头50日龄健康仔猪，3组免疫，1组对照，45天攻毒，30日观察肺脏病变，肺脏保护率：70.6%，71.5%，85.6%。

表2 鼻腔注射免疫效力测定

仔猪5日龄免疫效力测定（2批疫苗）结果见表3

表3 5日龄免疫效力测定

交叉保护试验（3批疫苗）结果见表4、5，3批活疫苗免疫接种猪45天用猪济南株和江苏株攻毒，25宰杀观察猪肺部病变，结果表明：济南株保护率80.3%、 77.8%和 80.9%；江苏株保护率84.7%、 79.7% 和83.6%；结果证明：3批疫苗对两个强毒株均能产生良好的保护力。

表4 交叉保护试验结果

表5 交叉保护试验结果

抗体产生快，维持时间长

猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）免疫敏感猪群后，免疫猪抗体上升快，免疫持续期可达6个月，能长时间抵抗野毒攻击。

胸腔注射3批疫苗结果见表6，35-40日龄健康仔猪，免疫后4、6和8个月分别攻毒，25天宰杀观猪察肺脏病变，评分，计算免疫保护力。结果表明：4个月保护率均达90%以上；6个月保护力可达64%以上；8个月的保护率45%以下。

表6 胸腔接种免疫期

鼻腔接种3批疫苗结果见表7，30-36日龄健康仔猪，免疫后4和6个月分别攻毒，25天宰杀观察猪肺脏病变，评分，计算免疫保护力。结果表明4个月保护率可达70%以上；6个月的免疫保护力可达60%以上。

表7 鼻腔接种免疫期

2．安全

RM48株是流行强毒株在乳兔体内连续传代，使其减毒，培育出的一株毒力低，免疫原性好的兔化弱毒株，然后在培养基上反复传代，获得的培养基适应株，10倍剂量接种健康易感猪，仍然安全、有效。将RM48株在猪体上连传5代，毒力不返强，致弱彻底。用本动物反传5代，毒力不返强。第1代：MhpRM48菌株菌液3ml剂量胸腔接种3头仔猪，第25日宰杀；第2代：第1代肺组织匀浆，3ml剂量胸腔接种3头仔猪，第25日宰杀；第3-5代：同第2代，如此反复回传至第5代。每代肺部均无病变，PCR测定，均阳性。结果证明：MhpRM48弱毒株毒力不返强（结果见表8）。

表8 RM48株毒力返强试验

安全性测定超剂量接种（3批疫苗）结果见表9，胸腔注射：10头份/头，接种5头猪了；鼻腔接种：20头份/头，接种5头猪，观察25天，既无临床不良反应，也无肺脏病理变化。

表9 超剂量安全性测定无不良反应

单剂量接种（3批疫苗）结果见表10，第1次接种，观察40天，第2次接种后观察25天，所有猪均无临床不良反应，也无肺脏病变。

表10 单剂量安全性测定

仔猪5日龄安全性试验见表11。

表11 5日龄安全性试验

3．使用方便

国际上唯一可采用鼻腔免疫的猪支原体活疫苗，解决了目前市场上活疫苗只能胸腔注射的应用限制。

4．稳定

工艺稳定 冻干工艺先进、稳定，独特配方的冻干保护剂，改善了疫苗毒株的生存环境，有效降低疫苗在保存、运输和免疫操作过程中造成的效价损失。

生产稳定 公司有50多年的疫苗生产经验，老、中、青三代专业技术人员稳定生产，并不断进行技术革新，产品质量国内一流。

批次间质量稳定 生产过程中班组、车间、QA全程严格质量控制，半成品、成品生产中严格量化指标，出厂产品批次间稳定，保证不同批次疫苗的使用效果。

三、用法与用量

1.鼻腔接种：断奶前后健康仔猪，用灭菌PBS（0.01mol/L，pH值7.2）按瓶签注明头份稀释成1头份/ml，在猪吸气时将疫苗喷射入鼻腔深部，每头猪接种疫苗2ml。

2.胸腔接种：30日龄以上的健康猪，用灭菌PBS（0.01mol/L，pH值7.2）按瓶签注明头份稀释成1头份/ml，在右侧肩胛后缘约2cm肋间隙进针，每头猪胸腔内注射疫苗1ml。

四、临床应用效果显著

死淘率降低近10%，饲料转化效率提高15%-20%，出栏时间提前3-10天，剖检肺部健康指数显著提高临床免疫效力。其结果见表12、13。

表12 免疫效力测定

表13 临床肺脏保护率

五、注意事项

疫苗接种前3日，接种后两周内应停用除青霉素、链霉素和磺胺类以外的用于治疗支原体病的药物；本疫苗仅用于健康猪，疫苗稀释后2小时内用完；采用胸腔接种时，应严格注意猪体表的消毒和每头猪更换1次针头；如果胸腔接种后出现过敏反应，应立即注射肾上腺素，改为鼻腔内接种。