中药微生态制剂对雏鸡免疫力的影响
(哈尔滨中科生物工程有限公司，韩小米)
摘要：1日龄AA雏鸡随机分为微生态制剂--本草倍利康试验组和对照组，用间接酶联免疫吸附试验(IELISA)法分别测定了2组雏鸡泪液、气管液、胆汁和肠液的IgA、IgM、IgG相对含量的动态变化。结果发现，雏鸡服用微生态制剂--本草倍利康后1-49 d，上述4种体液的3种免疫球蛋白含量均不同程度地高于未服用本草倍利康的对照组雏鸡，表明本草倍利康可在一定程度上增强雏鸡呼吸道和消化道局部的体液免疫功能，提高雏鸡免疫力。
微生态制剂--本草倍利康是摄入后能对机体健康或生理机能产生有益影响的活菌微生态发酵制剂，常被用作饲料添加剂，可以提高动物生产性能、饲料转化率，以及增强动物抗病能力。禽大多数传染病是通过局部黏膜途径传播的，而局部黏膜免疫系统是机体抵抗外界环境变化和病原微生物入侵的第一道屏障，广泛分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道及一些外分泌腺的淋巴组织，是执行局部特异性免疫功能的主要场所。本研究对服用微生态制剂--本草倍利康雏鸡局部体液(泪液、气管液、胆汁和肠液)的IgA、IgM、IgG含量进行动态检测，为本草倍利康在兽医临床应用及进一步市场推广提供理论依据。
1 时间、地点、材料与方法
1. 1 试验时间和地点
试验时间：2012年5月17日--2012年7月9日;
试验地点：在江苏省宿迁市某大型肉鸡养殖场。
1．2 试验动物
1日龄AA混合肉雏鸡80只，购自安徽省合肥市某孵化场，鸡传染性法氏囊病、马立克氏病和传染性支气管炎等抗体检测均为阴性。
1．3 微生态制剂
微生态制剂--本草倍利康：由哈尔滨中科生物工程有限公司生产，批号：饲添字(2007)2316号，按产品说明使用。
1．4 兔抗鸡IgA、IgG、IgM血清
兔抗鸡IgA、IgG、IgM血清由扬州大学农学院禽病免疫病理研究室制备。
1．5 HRP标记羊抗兔IgG结合物
辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔IgG，购自北京中杉金桥生物技术有限公司，批号：83228，ZB一2301。
1．6 试验动物分组及处理
80只雏鸡随机分为本草倍利康组(P组)和对照组(C组)。其中P组雏鸡分别于1-49日龄连续灌服本草倍利康发酵液稀释液，1次／d；C组雏鸡于上述相同时间灌服等量生理盐水。
1．7 被检材料采集
分别于0、4、7、10、17、24、38、52日龄每组随机抽取5只雏鸡，采集泪液，然后心脏采血处死，采集气管液、胆汁和肠液，低温保存，供免疫球蛋白含量检测用。
1．8 检测指标及方法
用间接ELISA法测定泪液、肠液、气管液和胆汁IgA、IgG、IgM相对含量：①将待检体液用0．05 mol／L PH 9．6的碳酸盐缓冲液适当倍数稀释后，加入96孔聚苯乙烯酶标板中(200μL／孔)，4℃湿盒过夜；②0．01 mol／L PH 7．4磷酸盐缓冲液(含
0.05％Tween一20)洗涤，5 min／次×3，控干；③分别加入适度稀释的兔抗鸡IgA、IgC、IgM血清，每孔200μL，37℃湿盒内作用2 h；④重复步骤②；⑤每孔加入适当稀释的HRP-羊抗兔IgG结合物200μL，37℃湿盒内反应2 h；⑥重复步骤②；⑦每孔加人50μL TMB显色液，室温显色10-15 min；⑧每孔加入50μL 2 mol／L H2S04。终止反应，在DG3022酶联比色检测仪上测定450 nm的光密度(OD)值。每个被检样品设3个重复，同时每个反应板设空白对照及阴性对照。
1．9 数据处理
采用SPSS 16．0软件进行数据处理，比较各组间差异。
2 结果
2．1 雏鸡服用本草倍利康后泪液和气管液免疫球蛋白相对含量的动态变化
从表1可知，雏鸡服用本草倍利康后1-49 d，其泪液Iga、lgM和19G含量均不同程度地高于未服用本草倍利康的对照组雏鸡，其中IgM和IgG于4-7 d较对照雏鸡明显升高(P<0．05或P<0．01)；IgA含量于7-21 d明显高于对照雏鸡(P<0．05)。气管液IgA、lgM、IgG均于7 d和21 d差异显著或极显著增加(P<0．05或P<0．01)；IgG、IgM含量分别于14d、49 d明显高于相应对照雏鸡(P<0．05)。
表1 雏鸡使用本草倍利康后泪液和气管液免疫球蛋白含量变化
2．2 雏鸡服用本草倍利康后胆汁和肠液免疫球蛋白相对含量的动态变化
由表2可见，雏鸡服用本草倍利康后，其胆汁IgA含量于1-7d和21 d极显著高于对照雏鸡(P-7 d、21 d和35d明显高于对照雏鸡(P<0.01或P<0．05)。而肠液IgA、IgM、IgG均于7-21 d明显高于未服用本草倍利康的对照雏鸡(P<0．01)；IgM、IgG含量又于4d、49d明显高于对照雏鸡(P<0．01或P<0．05)。
表2雏鸡应用本草倍利康后胆汁和肠液免疫球蛋白含量变化
3讨论
有效防治畜禽传染病是保证畜牧业健康发展的首要问题，禽类大多数传染病是通过消化道和呼吸道等黏膜途径传播的。大量试验证明，黏膜免疫不仅在黏膜局部和其它黏膜组织产生免疫应
答，还可引起全身免疫改变。因此，近年来黏膜免疫倍受国内外学者的密切关注。通过本次试验发现，1日龄肉雏鸡在开食前服用本草倍利康后，其泪液、气管液、肠液和胆汁的IgA、IgM、IgG相对含量均较对照组雏鸡不同程度增高。本草倍利康组雏鸡呼吸道和消化道局部体液的IgA、IgM、IgG含量分别在第7天及第21天明显高于对照组雏鸡。之后，随日龄增加，本草倍利康组雏鸡和对照组雏鸡局部体液的免疫球蛋白含量逐渐趋于相同，表明本草倍利康在一定范围内可增强雏鸡局部体液免疫功能，提高免疫力。有人在肉鸡饮水中添加芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌后与对照组相比，其气管液和胆汁中IgG含量显著升高，可见上述3种菌复合剂可提高机体局部免疫水平。有研究人员给1日龄雏鸡饲喂乳酸菌后，其IgA天然抗体水平明显高于未服用乳酸菌的雏鸡。
作为兽药和饲料添加剂的益生菌菌种主要有乳酸菌、芽孢杆菌和双歧杆菌等，其主要通过刺激方式对机体免疫系统发挥作用。免疫刺激可使个体免疫反应功能提高，这对免疫缺陷或免疫低下动物尤为重要一。多数乳酸杆菌和双歧杆菌可激发动物主动免疫系统的较早建立，增加其防病、抗病能力。还有人用添加有微生态制剂或寡糖的饲料饲喂三黄鸡，结果微生态制剂组肉鸡免疫器官指数、白细胞吞噬率及新城疫抗体效价显著提高。研究发现，在提高乌骨鸡免疫机能方面，微生态制剂比抗生素具有更大的优势。也有研究者发现，用微生态制剂饲喂肉鸡，其脾脏、法氏囊、胸腺指数分别提高18．47％、6．42％、41．46％。
雏鸡服用微生态制剂在短期内增加体液免疫球蛋白的产生，可能是微生态制剂中的活性乳酸菌增强了肠道派伊尔结等对抗原的识别能力，同时活化肠道相关淋巴组织，活化集合淋巴结生发中心的B细胞，促进其转化为浆细胞。浆细胞进入淋巴系统，经胸导管进入血循环，逐步分化成熟，在特异的归巢受体介导下，多数免疫细胞归巢到致敏部位的黏膜内，即肠黏膜内，形成肠液中的免疫球蛋白，发挥免疫效应，少数免疫细胞进入其它黏膜部位，进而使泪液、气管液和胆汁免疫球蛋白含量相继分泌增多。不同黏膜部位的免疫反应相交联，表明黏膜既存在局部免疫，又存在着共同黏膜免疫系统。
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