近几年北京地区猪瘟和猪大肠杆菌病发病比较普遍,就我所记录2003年共接诊猪病料147次,其中单纯性猪瘟占猪病的62%、单纯性猪大肠杆菌病占5%、而猪瘟和大肠杆菌两病混合感染的占24%,其他疾病占9%。可见,猪瘟和大肠杆菌病严重危害着养猪业的发展,应引起兽医界的重视。2003年10月北京通州区某养猪场45日龄的猪突然发病,先后陆续死亡了17头,据了解在仔猪20日龄时曾注射过猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗。发病猪体温升高到41℃以上,然后下降,最后又上升呈稽留热,病程一般在5~6天左右,精神沉郁,食欲减退,结膜潮红,齿龈溃疡,耳、腹下、四肢、背部、会阴等部位皮下有不同程度的出血,呈紫红色。病猪腹泻、消瘦,后期行走无力,摇晃,站立困难,最后衰竭死亡,病死率在70%以上。
1 病理剖检
皮下组织(脂肪、肌肉)普遍出血,肺脏部分出血、瘀血,心脏外膜、内膜和冠状沟有大小不等的出血点。脾脏周边梗死呈暗紫色。肾脏呈土黄色,皮质部有散在针尖大的出血点,髓质出血。颌下淋巴结、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结肿大、出血,切面呈红白相间的大理石样。喉头、气管出血。胃底黏膜大面积出血、溃疡,小肠黏膜出血,黏膜水肿,部分脱落,壁较薄,胃、肠内容物腥臭,结肠黏膜出血、溃疡。
2 病原诊断
2.1 猪瘟荧光抗体诊断 取病死猪扁桃体和肾组织放入BRIGHT冰冻切片机冷冻、切片若干张附着在载玻片上,用丙酮固定15 min,自然干燥后,在载玻片上滴加猪瘟荧光抗体。放在湿盒中37℃作用30 min,PBS浸洗3次,每次5 min,自然干燥后,在暗室里用荧光显微镜镜检,在切片组织胞浆中可见到亮绿色和黄绿色的荧光显现,由此证明该病死猪的脏器中含有猪瘟病毒。
2.2 细菌的分离鉴定
(1)取病死猪的肺、肝、脾、肠系膜淋巴结无菌操作接种到普通琼脂培养基中,放入恒温箱37℃培养24 h。琼脂培养基菌落灰黄色、不透明、圆形凸起、边缘不整齐、大而湿润,挑取单个菌落革兰氏染色镜检呈革兰氏阴性短粗的杆菌,长约3 μm,宽0.4 μm。挑取单个菌落接种到麦康凯和肉汤培养基,37℃培养24 h,麦康凯培养基菌落呈红色,肉汤培养基中呈均匀混浊生长。
(2)用菌液腹腔接种2只小鼠,每只注射0.15 ml,取无菌生理盐水0.15 ml腹腔接种小鼠做对照。接种菌液的小鼠分别在18 h和22 h死亡,剖检小鼠可见心肌、肺脏出血,肝瘀血,脾脏出血,小肠黏膜出血,将病料接种到麦康凯培养基上37℃培养24 h菌落呈红色。对照组小鼠健康。
(3)挑取普通琼脂菌落混均于0.5%氯化钠溶液做成菌悬液,于病原性大肠杆菌分组OK(或OB)多价血清与O分型血清做玻片凝集,与OK分型血清发生凝集而与O分型血清不凝集说明该菌株有K抗原,然后将菌液于100℃水域中加热15 min,破坏K抗原,在与OK与O分型血清检查得知该菌属于O101型(参照《食品病原微生物检验技术手册》)。
(4)吸0.45%氯化钠液2.0 ml加入到基物安培管中,将管放到VITEK比浊仪中调零,然后用铂金耳挑取单个菌落与基物安培管的稀释液混匀,制成1.0McFarland菌悬液(相当于含菌3×108个/ml),将调好的菌悬液吸附到GNI+和GNS-120药敏鉴定卡上插到细菌生化鉴定仪中反应2~12 h。结果:三氯新-,乙酰胺-,克氏尿素酶-,苯丙氨酸-,麦芽糖+,棉子糖-,肌醇-,硫化氢-,阿拉伯糖+,赖氨酸+,葡萄糖氧化+,七叶苷-,西蒙氏枸橼酸盐-,多粘菌素-,甘露醇+,山梨醇+,侧金盏花醇-,β半乳糖苷酶+,葡萄糖发酵+,鸟氨酸-,阳性生长控制+,植物尿蓝母-,丙二酸盐-,乳糖+,木糖+,蔗糖-,香豆酸+,鼠李糖+,精氨酸-,氧化酶-。符合大肠埃希氏菌的生化特征。
2.3 药敏试验结果 见表1。
根据以上流行病学、病理剖检和实验室检验,诊断本病为猪瘟和猪大肠杆菌混合感染。
3 防制
病死猪进行深埋处理;对全场进行猪瘟病毒检测,猪瘟病毒携带者、病猪隔离、淘汰;用0.5%灭毒净、2%氢氧化钠等对周围环境、猪舍、用具及排泄物进行消毒;猪群紧急接种猪瘟兔化弱毒苗,对已经发病的猪加5~6倍的剂量多点注射; 根据药敏试验,用庆大霉素、头孢曲松和磺胺嘧啶对症治疗。
表1 药敏试验结果
抗生素 最低抑菌浓度 结果 抗生素 最低抑菌浓度
结果
(μg/ml) (μg/ml)
氨苄西林 ≥32 耐药 环丙沙星 ≥4 耐药
氨曲南 ≥32 耐药 庆大霉素 2 敏感
头孢唑啉 ≤8 敏感 亚胺培南 ≤4 敏感
头孢吡肪 ≤4 敏感 左氟沙星 2 敏感
头孢替坦 ≤16 敏感 哌抗西林 ≥128 耐药
头孢他啶 16 中度敏感 妥布拉霉素 ≤0.5 敏感
头孢曲松 ≤8 敏感 磺胺 ≤10 敏感
由于采取了以上措施,经过5天控制了疫情,病猪恢复正常。
4 小结
建议把猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联苗改用单苗分别免疫,仔猪产后用猪瘟兔化弱毒苗做乳前免疫,免疫后1.5~2.0 h后方可吃初乳;监测母猪猪瘟抗体,不合格的要及时补种疫苗;坚持自繁自养原则,如果须从场外引进,必须经过检测,防止携带猪瘟病毒的猪引入;大肠杆菌除用药物对症治疗外,在预防上有猪大肠杆菌苗包括大肠三价、K88、K99应合理使用。如果条件允许,可以做大肠杆菌自家苗,免疫接种。